脱细胞基质水凝胶及其制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112089890A(43)申请公布日2020.12.18(21)申请号202010889600.3(22)申请日2020.08.28(71)申请人广东乾晖生物科技有限公司地址523808广东省东莞市松山湖高新技术产业开发区信息路5号融易大厦主楼604室(72)发明人高毅易笑(74)专利代理机构北京市立方律师事务所11330代理人刘延喜(51)Int.Cl.A61L27/36(2006.01)A61L27/52(2006.01)A61K9/06(2006.01)A61K47/46(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图5页(54)发明名称脱细胞基质水凝胶及其制备方法和应用(57)摘要本申请公开一种脱细胞基质水凝胶的制备方法，包括以下步骤：获得组织块；将所述组织块移入含0.02％的胰酶和0.05％的乙二胺四乙酸的溶液中搅拌2～3h；再将所述组织块移入含3％的TritonX的溶液中搅拌2～3h；再将所述组织块移入含4％的脱氧胆酸钠的溶液中搅拌2～3h；将所述组织块移入去离子水中浸泡12～18h，获得脱细胞支架；将所述脱细胞支架移入75％酒精中，浸泡30min，再移入含0.1％的过氧乙酸的溶液中搅拌2～3h；将所述脱细胞支架进行冻干和研磨成基质粉末之后，将所述基质粉末移入含盐酸胃蛋白酶的溶液中搅拌消化2～3d，获得预凝胶；所述预凝胶稀释成预设浓度，静置后获得脱细胞基质水凝胶。本申请从脐带组织中高效提取脱细胞基质水凝胶，且最大程度的保留了脱细胞基质内部结构的完整性。CN112089890ACN112089890A权利要求书1/1页1.一种脱细胞基质水凝胶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：获得组织块；将所述组织块移入含0.02％的胰酶和0.05％的乙二胺四乙酸的溶液中，在37℃的条件下，以350rmp的转速搅拌2～3h；再将所述组织块移入含3％的TritonX的溶液中，在27℃的条件下，以250rmp的转速搅拌2～3h；再将所述组织块移入含4％的脱氧胆酸钠的溶液中，在27℃的条件下，以250rmp的转速搅拌2～3h；将所述组织块移入去离子水中，在27℃的条件下浸泡12～18h，获得脱细胞支架；将所述脱细胞支架移入75％酒精中，浸泡30min，再移入含0.1％的过氧乙酸的溶液中，以150rmp的转速搅拌2～3h；将所述脱细胞支架进行冻干和研磨成基质粉末之后，将所述基质粉末移入含盐酸胃蛋白酶的溶液中搅拌消化2～3d，获得预凝胶；所述预凝胶在37℃的条件下稀释成预设浓度，静置后获得脱细胞基质水凝胶。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述组织块来源于脐带。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述组织块裁切成3～4cm宽的块段。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述组织块和脱细胞支架移入不同的处理溶液之前，还包括用去离子水清洗的步骤。5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述将所述脱细胞支架冻干和研磨成基质粉末，包括：将所述脱细胞支架置入-80℃的环境3～4h；转移到冻干机进行冻干处理；转移到液氮预冷的研磨器内研磨。6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述研磨器的研磨频率为60Hz，研磨时间为120s。7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述预凝胶的浓度为10mg/ml。8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述预凝胶用于培养细胞和制备类器官前需利用磷酸缓冲液和氢氧化钠进行中和。9.一种脱细胞基质水凝胶，其特征在于，其采用如权利要求1～8所述的脱细胞基质水凝胶的制备方法制得。10.如权利要求9所述的脱细胞基质水凝胶在制备药物载体中的应用，以及/或者在制备干细胞移植载体中的应用，以及/或者在构建人工器官中的应用。11.如权利要求1～8所述的脱细胞基质水凝胶的制备方法在制备药物载体中的应用，以及/或者在制备干细胞移植载体中的应用，以及/或者在构建人工器官中的应用。2CN112089890A说明书1/5页脱细胞基质水凝胶及其制备方法和应用技术领域[0001]本申请涉及一种生物材料领域，尤其涉及一种脱细胞基质水凝胶及其制备方法和应用。背景技术[0002]在生物体内，细胞的更新和分化与不断变化的环境协调一致，这种环境的特征是通过与邻近细胞的相互作用，多种因素的时空梯度变化，这在标准的二维培养条件下很难实现。开发模仿天然组织微环境的3D培养系统成为研究热点。细胞外基质(ECM)是组织和器官的细胞分泌到胞外的复合物，分布于细胞表面和细胞间隙。其成分复杂，是结构蛋白和功能蛋白的复合体，具体包含I型胶原蛋白、III型胶原蛋白、纤维连接蛋白、层粘连蛋白、糖胺聚糖(GAG)和多种细胞生长因子等。ECM经胰蛋白酶消化后可获得ECM水凝胶，在组织工程领域所有