鱼皮脱细胞真皮基质及其制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112618799A(43)申请公布日2021.04.09(21)申请号202011580520.6(22)申请日2020.12.28(71)申请人上海理工大学地址200093上海市杨浦区军工路516号(72)发明人马通孙文全(74)专利代理机构上海伯瑞杰知识产权代理有限公司31227代理人范艳静(51)Int.Cl.A61L27/36(2006.01)A61L27/60(2006.01)A61L2/18(2006.01)权利要求书2页说明书9页附图4页(54)发明名称鱼皮脱细胞真皮基质及其制备方法和应用(57)摘要本发明提供了一种鱼皮脱细胞真皮基质及其制备方法和应用，该制备方法包括将新鲜鱼皮预处理后，经过清洗、消毒、脱细胞处理、病毒灭活、去重金属清洗、保护液处理和终端灭菌等过程，本发明的鱼皮脱细胞真皮基质材料的制备方法中没有使用化学交联剂，无需引入有机溶剂，可有效控制热原、细菌等污染风险，制备工艺可控性强，依据本发明方法所制备的鱼皮脱细胞真皮基质材料比鱼源原材料热稳定性更好，更适合用于人体软组织修复再生；另外，本发明的脱细胞鱼皮基质材料较好地保留组织的天然三维结构，可为细胞或组织的再生提供良好的仿生微环境；同时又能保留脱细胞基质材料良好的力学性能和柔韧性，更好地满足临床要求。CN112618799ACN112618799A权利要求书1/2页1.一种鱼皮脱细胞真皮基质的制备方法，其特征在于：其包括如下步骤：(1)、鱼皮预处理：将新鲜鱼皮刮去鱼鳞及残肉，并清洗干净；(2)、清洗：以料液比1:3‑1:20的0.5‑5wt％的氯化钠溶液或含有0.5‑5wt％的氯化钠的磷酸盐缓冲液浸泡处理鱼皮原料0.5‑8h后去除废液，浸泡处理至少一次；(3)、初次病毒灭活处理：将清洗后的鱼皮材料经裁剪后，浸泡在料液比1:3‑1:20的0.05‑1wt％的过氧乙酸和0.5‑10wt％的盐溶液组成的第一混合溶液中，浸泡处理0.5‑1h后去除废液；(4)、脱细胞处理：以料液比1:3‑1:20的脱细胞溶液处理8‑40h，将鱼皮材料在脱细胞溶液中挤压吸涨；第一次脱细胞时间为8‑40h，第二次更换新鲜脱细胞溶液再处理2‑8h，去除废液；(5)、清洗：以料液比1:3‑1:20的中性盐溶液浸泡处理0.5‑2h后去除废液，浸泡处理至少一次；(6)、再次病毒灭活处理：以料液比1:3‑1:20的0.05‑1wt％的过氧乙酸和0.5‑10wt％的盐溶液组成的第一混合溶液中处理2‑6h后去除废液；(7)、去重金属清洗：以料液比1:3‑1:20的5‑50mmol/L的乙二胺四乙酸二钠溶液和0.1‑2wt％中性盐溶液组成的第二混合溶液中清洗，第一次清洗时间为0.5‑2h，第二次更换新鲜溶液再处理8‑24h，去除废液；(8)、保护液处理：将脱细胞基质浸泡在以料液比1:3‑1:20的保护液中，浸泡0.5‑6h后去除废液；(9)、湿态样品无菌包装终端灭菌：将步骤(8)中样品经封装、辐照灭菌，即为湿态成品；(10)、干态样品无菌包装终端灭菌：将步骤(7)中样品用无菌水以料液比1:3‑1:20清洗1‑3次，去除废液并封装，冻干后进行灭菌，即为干态成品。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，所述鱼皮的原材料选自三文鱼、罗非鱼、鳕鱼、比目鱼、巴沙鱼、鳗鱼皮和鲇鱼中的一种以上。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(3)和(6)中，所述盐溶液的pH值为5.5‑9.0，所述盐溶液中的盐选自硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫酸铵、磷酸钠、磷酸钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、氯化钠、氯化钾和氯化镁中的一种以上。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(4)中，所述脱细胞溶液由洗涤剂和中性盐溶液组成；所述洗涤剂选自0.1‑3wt％脱氧胆酸钠溶液、0.1‑1wt％曲拉通、0.1‑5wt％十二烷基硫酸钠溶液和0.1‑1wt％的3‑[3‑(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐中的一种以上；所述中性盐溶液选自氯化钠溶液、磷酸盐缓冲液、羟乙基哌嗪乙硫磺酸溶液、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐溶液和乙二氨四乙酸二钠溶液中的一种以上。5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(5)和(7)中，所述中性盐溶液选自氯化钠溶液、磷酸盐缓冲液、羟乙基哌嗪乙硫磺酸溶液和三羟甲基氨基甲烷盐酸盐溶液中的一种以上。6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(8)中，所述保护液选自氯化钠溶液和2‑15wt％甘油溶液中的一种以上；所述甘油溶液由Hank’s液、D‑Hank’s液或透明质酸溶液和甘油配制得到。7.一种鱼皮脱细胞真皮基质，其特征在于：其由权利要求1‑6任一项所述的制备方法得2CN11261