一种脱细胞真皮基质材料及其制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112618796A(43)申请公布日2021.04.09(21)申请号202011280094.4A61L31/14(2006.01)(22)申请日2020.11.16A61L2/20(2006.01)A61L101/44(2006.01)(71)申请人北京奥精医疗器械有限责任公司地址100026北京市大兴区中关村科技园区大兴生物医药产业基地永旺西路26号院2号楼1层、2层、3层、4层北侧(72)发明人李良才宋天喜仇志烨崔云胡艳丽何志敏朱金亮朱艳泽(74)专利代理机构北京开阳星知识产权代理有限公司11710代理人姚金金(51)Int.Cl.A61L27/36(2006.01)A61L27/50(2006.01)A61L31/00(2006.01)权利要求书2页说明书9页附图1页(54)发明名称一种脱细胞真皮基质材料及其制备方法和应用(57)摘要本发明涉及一种脱细胞真皮基质材料及其制备方法和应用。所述方法为：真皮原料的预处理；病毒灭活处理：在超声波清洗机中将真皮原料用碱溶液浸泡处理，然后用纯化水洗净；在超声波清洗机中用酸溶液对病毒灭活处理的材料进行脱细胞处理；更换酸溶液后重复脱细胞处理步骤1～5次，得到脱细胞处理材料；在超声波清洗机中依次用磷酸盐缓冲溶液和纯化水对脱细胞处理材料进行清洗，得到脱细胞真皮组织；将脱细胞真皮组织进行冷冻干燥；对材料依次进行裁剪和包装，采用环氧乙烷灭菌，制得脱细胞真皮基质材料。本发明降低了产品的细胞毒性风险，能更好的保留材料的三维结构与胶原蛋白，避免了酶残留导致的免疫原性，更有利于保持材料良好的机械性能。CN112618796ACN112618796A权利要求书1/2页1.一种脱细胞真皮基质材料的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)取动物皮肤组织材料，清除表面脂肪及表皮，并用超声波清洗机洗净，得到预处理后的真皮原料；(2)在超声波清洗机中将步骤(1)得到的预处理后的真皮原料用碱溶液浸泡处理，然后用纯化水洗净，得到病毒灭活处理的真皮材料；(3)在超声波清洗机中用酸溶液对步骤(2)得到的病毒灭活处理的真皮材料进行脱细胞处理；(4)更换所述酸溶液后重复步骤(3)1～5次，得到脱细胞处理材料；(5)在超声波清洗机中依次用磷酸盐缓冲溶液和纯化水对步骤(4)得到的脱细胞处理材料进行清洗，得到脱细胞真皮组织；(6)将步骤(5)得到的脱细胞真皮组织进行冷冻干燥；(7)对步骤(6)中冷冻干燥后的脱细胞真皮组织依次进行裁剪和包装，然后采用环氧乙烷灭菌，制得脱细胞真皮基质材料。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：在步骤(1)中，所述动物皮肤组织材料选自猪、牛或羊的皮肤组织，优选的是，所述动物皮肤组织材料选自猪或牛的皮肤组织。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述超声波清洗机的频率为10～40kHz优选为25～40kHz。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：在步骤(2)中，所述碱溶液为KOH溶液和/或NaOH溶液，所述碱溶液的浓度为0.001～1mol/L，所述碱溶液的体积用量为所述预处理后的真皮原料体积的2～20倍；和/或在步骤(2)中，用碱溶液浸泡处理的时间为30～120min。5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：在步骤(3)中，所述酸溶液为盐酸、硫酸、硝酸、甲酸中的一种或多种，所述酸溶液的浓度为0.001～1mol/L，所述酸溶液的体积用量为所述预处理后的真皮原料体积的2～20倍；和/或在步骤(3)中，用酸溶液进行脱细胞处理的时间为30～120min。6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：在步骤(5)中，所述磷酸盐缓冲溶液的pH值为7.0～7.4，用于配制所述磷酸盐缓冲溶液的试剂为NaCl、KCl、KH2PO4和Na2HPO4，所述磷酸盐缓冲溶液的体积用量为所述预处理后的真皮原料体积的10～30倍；和/或在步骤(5)中，用磷酸盐缓冲溶液进行清洗的时间为30～120min。7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：在步骤(6)中，所述冷冻干燥包括如下子步骤：(a)将步骤(5)得到的脱细胞真皮组织在温度为‑30℃下进行预冷冻2h；(b)将进行预冷冻后的脱细胞真皮组织在温度为‑10℃的真空条件下处理10h，然后置于温度为0℃的真空条件下处理10h，以完成脱细胞真皮组织的第一阶段升华过程；(c)将完成了第一阶段升华过程的脱细胞真皮组织在温度为5℃的真空条件下处理4h，然后置于温度为15℃的真空条件下处理2h，再置于温度为25℃的真空条件下处理2h，最后2CN112618796A权利要求书2/2页置于温度为35℃的真空条件下处理2h，以完成脱细胞真皮组织的第二阶段升华过程，由此完成脱细