一种青霉素菌渣中青霉素残留效价的测定方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112710744A(43)申请公布日2021.04.27(21)申请号202011338051.7(22)申请日2020.11.25(71)申请人伊犁川宁生物技术股份有限公司地址835007新疆维吾尔自治区伊犁哈萨克自治州霍尔果斯经济开发区伊宁园区阿拉木图亚村516号(72)发明人赵佳静邓仕宏王小莉徐文科李香霖王远莉(74)专利代理机构北京慕达星云知识产权代理事务所(特殊普通合伙)11465代理人赵徐平(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)G01N30/06(2006.01)权利要求书1页说明书8页附图2页(54)发明名称一种青霉素菌渣中青霉素残留效价的测定方法(57)摘要本发明公开了一种青霉素菌渣中青霉素残留效价的测定方法，包括如下步骤：(1)取青霉素菌渣，研磨，用流动相A对其进行提取，离心，取上清液作为供试品溶液；(2)将青霉素工作对照品溶于流动相A中，得对照品溶液；(3)分别取供试品溶液和对照品溶液，利用高效液相色谱法测定峰面积，根据对照品和供试品的峰面积计算得到青霉素残留效价；该方法灵敏度高、分离效率高、选择性好、复性好、准确度高的优点，检测限可达0.03μg/ml，定量限可达0.25μg/ml。CN112710744ACN112710744A权利要求书1/1页1.一种青霉素菌渣中青霉素残留效价的测定方法，其特征在于，步骤如下：(1)取青霉素菌渣研磨，用流动相A对进行提取，离心分离，取上清液作为供试品溶液；(2)将青霉素标准品溶于流动相A中，得到对照品溶液；(3)取供试品溶液和对照品溶液，分别利用高效液相色谱法测定峰面积，并根据对照品溶液和供试品溶液的峰面积计算得到青霉素残留效价；所述高效液相色谱法的色谱条件为：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶填料色谱柱，流动相由流动相A、流动相B和流动相C组成，流速为0.8ml/min～1.2ml/min，柱温为25℃～40℃，检测波长为210nm～240nm，进样量10μl；流动相A：流动相B：流动相C的体积比为50:40:10。2.根据权利要求1所述的一种青霉素菌渣中青霉素残留效价的测定方法，其特征在于，步骤(1)中所述青霉素菌渣为喷雾干燥灭活的青霉素菌渣固体或青霉素菌渣液体；所述青霉素菌渣固体研磨后的粒径为D97≤300μm；所述青霉素菌渣液体研磨后的粒径为D97≤50μm。3.根据权利要求2所述的一种青霉素菌渣中青霉素残留效价的测定方法，其特征在于，所述青霉素菌渣固体与流动相A的质量体积比浓度为0.5～6：5～70g/ml；所述青霉素菌渣液体与流动相A的质量体积比浓度为0.5～6：5～70g/ml。4.根据权利要求1所述的一种青霉素菌渣中青霉素残留效价的测定方法，其特征在于，步骤(1)中所述提取为超声提取，频率为30～50KHz，时间为20～50min；所述离心的转速为3500～6000rpm,时间为5～30min。5.根据权利要求1所述的一种青霉素菌渣中青霉素残留效价的测定方法，其特征在于，步骤(2)中所述对照品溶液的浓度为0.9～1.1mg/mL。6.根据权利要求1所述的一种青霉素菌渣中青霉素残留效价的测定方法，其特征在于，所述流动相A为纯化水；所述流动相B为甲醇，所述流动相C为磷酸二氢钾缓冲溶液；所述流动相C的浓度为0.5mol/L～1.0mol/L，pH值为3.00～4.00。7.根据权利要求1所述的一种青霉素菌渣中青霉素残留效价的测定方法，其特征在于，所述步骤(3)中青霉素残留效价的计算式为：式中，X为样品中青霉素残留效价；m对为对照品溶液的质量；m样为供试品溶液质量；P为对照品溶液中青霉素的百分含量；A对为对照品溶液的峰面积；A样为供试品溶液的峰面积；D样为供试品溶液的稀释倍数；100为对照品溶液的稀释倍数；1000为单位换算系数。2CN112710744A说明书1/8页一种青霉素菌渣中青霉素残留效价的测定方法技术领域[0001]本发明涉及一种青霉素菌渣中青霉素残留效价的测定方法，属于检测技术领域。背景技术[0002]产生量非常巨大，菌渣中青霉素的残留，将会导致畜禽和生态环境微生物的耐药性，从而对人类健康产生潜在的耐药风险，因此，我国明确规定青霉素菌渣不能直接用作饲料和肥料并将其列入危险废弃物。[0003]青霉素是β‑内酰胺类中的一大类抗生素，分子式为C16H18N2O4S，分子量为334.39，结构式如下：[0004][0005]迄今为止，国内外尚没有一种检测青霉素菌渣中青霉素残留效价的标准方法，故不能准确的检测青霉素菌渣中青霉素的含量，无法确定其对环境可能的危害和影响，严重的制约了菌渣的资源化再利用，因此建立青霉素菌渣中青霉素残留效价测定方法，明确判断与放行标准，排