一种红霉素菌渣中红霉素A残留效价的测定方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112697893A(43)申请公布日2021.04.23(21)申请号202011364375.8G01N30/30(2006.01)(22)申请日2020.11.27G01N30/32(2006.01)G01N30/34(2006.01)(71)申请人伊犁川宁生物技术股份有限公司地址835007新疆维吾尔自治区伊犁哈萨克自治州霍尔果斯经济开发区伊宁园区阿拉木图亚村516号(72)发明人郑洁秦江涛李香霖王远莉陈楠(74)专利代理机构北京慕达星云知识产权代理事务所(特殊普通合伙)11465代理人赵徐平(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)G01N30/06(2006.01)权利要求书1页说明书8页附图2页(54)发明名称一种红霉素菌渣中红霉素A残留效价的测定方法(57)摘要本发明提供了一种红霉素菌渣中红霉素A残留效价的测定方法，包括以下步骤：制备供试品溶液；制备对照品溶液；测定红霉素A残留效价：取供试品溶液和对照品溶液，利用高效液相色谱法测定峰面积；高效液相色谱法的色谱条件为：流动相由流动相A和流动相B组成，所述流动相A为磷酸盐缓冲溶液，所述流动相B为乙腈，流动相A与流动相B的体积比为55:45，色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶填料色谱柱,流速为0.8‑1.2mL/min，柱温为25‑40℃，检测波长为215nm，进样量10μL；根据对照品和供试品的峰面积计算得到红霉素A残留效价。本发明检测方法灵敏度高、分离效率高、选择性好、重复性好、准确度高。CN112697893ACN112697893A权利要求书1/1页1.一种红霉素菌渣中红霉素A残留效价的测定方法，其特征在于,包括以下步骤：(1)制备供试品溶液：取待测红霉素菌渣，研磨，加入甲醇进行提取，离心，取上清液，得供试品溶液；(2)制备对照品溶液：将红霉素A溶于甲醇中，得对照品溶液；(3)测定红霉素A残留效价：取步骤(1)所得供试品溶液和步骤(2)所得对照品溶液，利用高效液相色谱法测定峰面积；所述高效液相色谱法的色谱条件为：流动相由流动相A和流动相B组成，所述流动相A为浓度为磷酸盐缓冲溶液，所述流动相B为乙腈，流动相A与流动相B的体积比为55:45，色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶填料色谱柱,流速为0.8‑1.2mL/min，柱温为25℃‑40℃，检测波长为215nm，进样量10μL；根据对照品和供试品的峰面积计算得到红霉素A残留效价。2.根据权利要求1所述的一种红霉素菌渣中红霉素A残留效价的测定方法，其特征在于，步骤(1)中，所述红霉素菌渣为灭活的喷雾干燥红霉素菌渣固体或红霉素菌渣液体；所述红霉素菌渣固体研磨后的粒径为D97≤300μm；所述红霉素菌渣液体研磨后的粒径为D97≤50μm。3.根据权利要求1或2所述的一种红霉素菌渣中红霉素A残留效价的测定方法，其特征在于，步骤(1)中，所述红霉素菌渣固体的添加量为每25ml甲醇添加红霉素菌渣固体2‑10g；所述红霉素菌渣液体的添加量为每25ml甲醇添加红霉素菌渣液体5‑15g。4.根据权利要求1所述的一种红霉素菌渣中红霉素A残留效价的测定方法，其特征在于，步骤(1)中，所述提取为超声提取，所述超声提取的频率为40KHz，所述超声提取的时间为20‑50min。5.根据权利要求1所述的一种红霉素菌渣中红霉素A残留效价的测定方法，其特征在于，步骤(1)中，所述离心转速为3000‑5000rpm，所述离心时间为5‑30min。6.根据权利要求1所述的一种红霉素菌渣中红霉素A残留效价的测定方法，其特征在于，步骤(2)中，所述红霉素A的添加量为每1mL甲醇添加4mg红霉素A。7.根据权利要求1所述的一种红霉素菌渣中红霉素A残留效价的测定方法，其特征在于，步骤(3)中，所述流动相A的浓度为0.001‑0.01mol/L。8.根据权利要求1所述的一种红霉素菌渣中红霉素A残留效价的测定方法，其特征在于，步骤(3)中，流速为1.0mL/min，柱温为35℃。9.根据权利要求1所述的一种红霉素菌渣中红霉素A残留效价的测定方法，其特征在于，步骤(3)中，所述红霉素A残留效价是通过下式计算得到：式中：x—红霉素A残留效价,μg/g；m对—对照品的质量，mg；m样—样品质量，g；P—对照品中红霉素A的百分含量,％；A对—对照品的峰面积；A样—样品的峰面积；D样—样品的稀释倍数；D对—对照品的稀释倍数；1000—单位换算系数。2CN112697893A说明书1/8页一种红霉素菌渣中红霉素A残留效价的测定方法技术领域[0001]本发明属于测定菌渣残留效价技术领域，涉及一种红霉素菌渣中红霉素A残留效价的测定方法。背景技术[0002]我国是红霉素的生产大国，红霉素菌渣是在发酵