靶向肾脏的近红外荧光探针及其制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113262312A(43)申请公布日2021.08.17(21)申请号202110408215.7(22)申请日2021.04.16(71)申请人复旦大学地址200433上海市杨浦区邯郸路220号(72)发明人张凡陈莹(74)专利代理机构上海正旦专利代理有限公司31200代理人陆飞陆尤(51)Int.Cl.A61K49/00(2006.01)权利要求书1页说明书4页序列表1页附图3页(54)发明名称靶向肾脏的近红外荧光探针及其制备方法和应用(57)摘要本发明属于生物材料技术领域，具体为一种靶向肾脏的近红外发光探针及其制备方法和应用。本发明的近红外发光探针由肾脏靶向多肽与发光材料共价连接组成；多肽氨基酸侧链的残基（包括氨基、羧基或巯基）与荧光分子形成化学键合；多肽用于增强荧光分子的水溶性以及靶向肾脏中的肾小管结构；荧光分子用于荧光成像。本发明的肾脏靶向探针对肾脏靶向特异性高，70%以上注射剂量的探针在肾脏富集，所述肾脏靶向探针在肾脏中靶向停留时间大于48h，可作为特异性肾脏靶向荧光成像剂，用于可用于对早期肾损伤状态进行诊断以及肾疾病治疗药物的靶向递送。CN113262312ACN113262312A权利要求书1/1页1.一种靶向肾脏的近红外发光探针，其特征在于，由肾脏靶向多肽与发光材料共价连接组成，其中多肽氨基酸侧链的残基与荧光分子形成化学键合；所述肾脏靶向多肽序列为：SHSNTQTLAKAPEHTGC、GHGNTQTLAKAPEHTGC或SHSSTARDLWPHGKEGC；其中，所述荧光分子包括有机小分子染料与无机纳米颗粒，所述有机小分子选自：cy3、cy5、FITC、AlexaFluor、DyLight、ICG、CX2、FD1080、LZ105；所述无机纳米颗粒选自金纳米颗粒GNP、量子点QD、康奈尔点CD、稀土纳米颗粒RENP。2.如权利要求1所述的靶向肾脏发光探针的制备方法，包括多肽‑有机小分子荧光探针的制备和多肽‑无机纳米荧光探针的制备两个部分；其特征在于：（1）多肽‑有机小分子荧光探针制备的具体步骤如下：将有机小分子染料溶于有机溶剂中，使用EDC/NHS进行活化，随后将反应液旋转蒸发干燥，再用柱色谱分离，得到活化后的有机小分子染料；将上述活化后的有机小分子染料溶于溶剂中，使用三乙胺调节溶液pH值，并加入多肽，进行偶联反应，即得最终产物；其中，所述溶剂选自氯仿、二氯甲烷、甲醇、乙酸乙酯、二甲基甲酰胺，二甲基亚砜、去离子水中的一种或几种；所述有机小分子染料与EDC/NHS、多肽的反应摩尔比为(1‑10):(1‑30)/(1‑50):1；活化时间为5‑40h，活化温度为20‑65摄氏度；调节溶液pH值范围为7‑12；与多肽偶联时间为3‑48h，偶联反应温度为20‑95摄氏度；（2）多肽‑无机纳米荧光探针制备的具体步骤为：将无机纳米颗粒溶于溶剂中，加入多肽进行配位反应，即得最终产物；其中，所述溶剂选自氯仿、二氯甲烷、甲醇、乙醇、二甲基甲酰胺，二甲基亚砜、去离子水中的一种或几种；无机纳米颗粒与多肽的反应质量浓度比为(1‑10):1；反应时间为3‑48h，反应温度为20‑95摄氏度。3.如权利要求1所述的肾脏靶向荧光探针在制备特异性肾脏靶向荧光成像剂中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，是将肾靶向探针溶于去离子水或生理盐水中，浓度为0.5‑5mg/mL。5.根据权利要求4所述的应用，所述肾脏靶向荧光成像剂，通过小鼠静脉注射进行肾脏活体成像。2CN113262312A说明书1/4页靶向肾脏的近红外荧光探针及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明属于生物材料技术领域，具体涉及一种基于靶向肾脏的荧光探针及其制备方法和应用。背景技术[0002]肾脏疾病在早期通常是没有临床症状的，但随着肾脏疾病的发展最终可能导致严重的肾功能衰竭。全世界近10%的成年人患有早期无症状的肾脏疾病，这些疾病每年导致约200万人死于后期的肾衰竭。目前临床对于肾脏疾病的诊断方法依赖于测定血尿素氮(BUN)和血肌酐(sCr)，然而，这些标志物往往在早期肾损伤时没有明显变化，在约50%的肾小球滤过率(GFR)丧失之前，这些临床检查标志物仍保持在正常范围内，因此不能用于早期肾损伤检测。非侵入性活体成像技术，如单光子发射计算机断层扫描(SPECT)，磁共振成像(MRI)，正电子发射断层扫描/计算机断层扫描(PET/CT)能被用于评估不同阶段的肾脏功能障碍，然而这些战略受到其高成本、辐射风险和低可及性的限制。[0003]基于荧光的成像技术具有快速反馈、非电离辐射、高时空分辨率和灵敏度高等优点，可以直接显示生物体内的动态变化，目前已广泛应用于生物成像和生物传感领域。尤其是利用近红外第二窗口成