外泌体联合透明质酸的伤口敷料及其制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113509590A(43)申请公布日2021.10.19(21)申请号202110633285.2(22)申请日2021.06.07(71)申请人广东唯泰生物科技有限公司地址528200广东省佛山市南海区桂城街道夏南路61号1号楼8层801室(72)发明人蒙燕瑶唐淑艳刘小翠杨景利王进辉(74)专利代理机构广州三环专利商标代理有限公司44202代理人胡枫李素兰(51)Int.Cl.A61L26/00(2006.01)C12N5/0775(2010.01)权利要求书2页说明书13页附图3页(54)发明名称外泌体联合透明质酸的伤口敷料及其制备方法和应用(57)摘要本发明公开了外泌体联合透明质酸的伤口敷料及其制备方法和应用，所述伤口敷料由透明质酸水凝胶包裹间充质干细胞外泌体构成，所述透明质酸水凝胶是透明质酸水溶液经过反复冷冻解冻再与碳二亚胺盐酸盐及已二酸二酰肼进行交联所获得。相应地，本发明还公开了上述外泌体联合透明质酸的伤口敷料的制备方法，以及其在促进伤口愈合药物或材料中的应用。本发明中的伤口敷料结合了间充质干细胞的外泌体和透明质酸水凝胶的特性，与伤口创面接触后，可促进血管再生、胶原合成，从而修复损伤的组织，且安全可靠，生物相容性好，对创面的愈合具有明显促进作用，不容易造成感染，愈合后不留疤痕。CN113509590ACN113509590A权利要求书1/2页1.一种外泌体联合透明质酸的伤口敷料，其特征在于，所述伤口敷料由透明质酸水凝胶包裹间充质干细胞外泌体构成，所述透明质酸水凝胶是透明质酸水溶液经过反复冷冻解冻再与碳二亚胺盐酸盐及已二酸二酰肼进行交联所获得。2.如权利要求1所述的外泌体联合透明质酸的伤口敷料，其特征在于，所述透明质酸水凝胶由下述方法制得：称量透明质酸粉末，然后加入去离子水进行溶解，形成最终浓度为0.5‑2％的透明质酸水溶液；将所述透明质酸水溶液搅拌均匀，并反复冷冻解冻至少两次；将酸性溶液缓慢的加入到所述透明质酸水溶液中，测量pH值，直至pH值为4.4‑5停止；然后加入己二酸二酰肼，混合均匀，再加入碳二亚胺盐酸盐搅拌，后缓慢加入碳酸氢钠溶液，调整pH值到6.5‑7.5，得到透明质酸水凝胶。3.如权利要求2所述的外泌体联合透明质酸的伤口敷料，其特征在于，所述透明质酸水溶液在磁力搅拌器上进行搅拌均匀，并反复冷冻解冻至少两次，其中，冷冻条件为：在‑(15‑25)℃环境下保存8‑14h；解冻条件为：在35～38℃水浴锅中保存0.5‑2.5h；所述酸性溶液为浓度为0.5‑2mol/L的盐酸溶液；所述碳酸氢钠溶液的浓度为0.5‑2mol/L；以质量分数计，所述己二酸二酰肼的加入量为透明质酸加入量的1～5％，所述碳二亚胺盐酸盐的加入量为透明质酸加入量的1～5％。4.一种外泌体联合透明质酸的伤口敷料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：从脐带间充质干细胞培养液的上清液中分离纯化出间充质干细胞外泌体，采用PBS重新悬浮所述间充质干细胞外泌体，除菌，并冷冻保存；S2：对透明质酸水溶液进行反复冷冻解冻，使其发生物理交联，然后再加入已二酸二酰肼和碳二亚胺盐酸盐进行化学交联，调节pH后得到透明质酸水凝胶；S3：将所述透明质酸水凝胶包裹所述间充质干细胞外泌体，得到伤口敷料。5.如权利要求4所述的外泌体联合透明质酸的伤口敷料的制备方法，其特征在于，S2步骤包括：称量透明质酸粉末，然后加入去离子水进行溶解，最终形成浓度为0.5‑2％的透明质酸水溶液；在磁力搅拌器上进行搅拌均匀，对透明质酸水溶液进行反复冷冻解冻至少两次，使其发生物理交联；配置0.5‑2mol/L的盐酸溶液，并缓慢的加入到所述透明质酸溶液中，测量pH值，直至pH值为4.4‑5停止；然后加入己二酸二酰肼，混合均匀，再加入碳二亚胺盐酸盐搅拌，使其发生化学交联，其中，所述己二酸二酰肼的加入量为透明质酸粉末加入量的1‑5％，所述碳二亚胺盐酸盐的加入量为透明质酸粉末加入量的1‑5％；最后缓慢加入0.5‑2mol/L的碳酸氢钠溶液，调整pH值到6.5‑7.5，得到透明质酸水凝胶。6.如权利要求4或5所述的外泌体联合透明质酸的伤口敷料的制备方法，其特征在于，在对透明质酸水溶液进行反复冷冻解冻过程中，冷冻条件为：在‑(15‑25)℃环境下保存8‑2CN113509590A权利要求书2/2页14h；解冻条件为：在35～38℃水浴锅中保存0.5‑2.5h。7.如权利要求1所述的外泌体联合透明质酸的伤口敷料的制备方法，其特征在于，S1步骤包括：将脐带组织清理后接种培养，待原代细胞生长至70‑75％融合度进行传代培养；选用生长状况良好的P2代脐带间充质干细胞，接种培养，加入促进外泌体分泌的细胞刺激因子，待细胞生长至85‑95％