一种脱细胞基质复合材料及其制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113679889A(43)申请公布日2021.11.23(21)申请号202110820609.3(22)申请日2021.07.20(71)申请人杭州贤石生物科技有限公司地址310000浙江省杭州市萧山区经济技术开发区金一路79号D座112室(72)发明人俞小华陈家煜姜乃璋孙卫楼其磊(74)专利代理机构成都帝鹏知识产权代理事务所(普通合伙)51265代理人李华(51)Int.Cl.A61L27/36(2006.01)A61L27/40(2006.01)A61L27/50(2006.01)权利要求书2页说明书6页附图3页(54)发明名称一种脱细胞基质复合材料及其制备方法和应用(57)摘要本发明公开了一种脱细胞基质复合材料及其制备方法和应用，本发明是将前处理后的来自血管组织及真皮组织材料经过消毒灭菌、微颗粒化、脱细胞等步骤，获得两种不同种类的脱细胞基质，并采用一定比例将血管脱细胞基质与真皮脱细胞基质进行复合，形成一种能够诱导组织局部血管化的脱细胞生物基质材料。本发明采用物理法与化学法相结合的脱细胞方法，在有效去除可能引起人体免疫反应的抗原物质的同时，能够最大限度保留细胞外基质原有的基本支架结构和主要生物化学成分；并充分利用血管脱细胞基质内含有的促血管化因子，促进组织缺损处早期成血管化，为周围的新生组织提供丰富的氧气和营养物质，有助于对病变和缺损组织的修复修补。CN113679889ACN113679889A权利要求书1/2页1.一种脱细胞基质复合材料，其特征在于，所述脱细胞基质复合材料是由血管脱细胞基质和真皮脱细胞基质复合形成的具有三维多孔网状结构，其中，所述血管脱细胞基质与真皮脱细胞基质的重量比为1:1～2:1。2.根据权利要求1所述的脱细胞基质复合材料，其特征在于，所述血管脱细胞基质和真皮脱细胞基质来源于哺乳动物的软组织；优选的，所述哺乳动物包括猪、牛和人。3.一种如权利要求1或2所述的脱细胞基质复合材料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(一)血管组织脱细胞基质的制备(1)前处理：取血管组织原材料，清洗除去血液和污垢，将整个动脉剪开切成所需规格尺寸的组织原材料，均匀研磨成微小粒径的颗粒，然后放入酶溶液内降解处理，清洗离心除去酶溶液，再放入脱细胞液中过夜处理；(2)血管脱细胞基质的制备：对步骤(1)所得产物进行清洗，离心除去上清液，所得物用脱细胞液进行二次处理，清洗除去表面的脱细胞液，离心除去上清液后获得血管脱细胞基质；(二)真皮组织脱细胞基质微颗粒的制备(3)前处理：收集真皮组织原材料，清洗除去血液和污垢，切割成所需规格尺寸的组织原材料，进行消毒和清洗；(4)真皮脱细胞基质微颗粒化：将消毒后的组织原材料均匀研磨成微小粒径的颗粒，然后用脱细胞液浸泡去细胞后，清洗离心除去脱细胞液；用无菌生理盐水对所得物进行清洗，离心除去上清液，获得真皮脱细胞基质微颗粒；(三)脱细胞基质复合材料的制备(5)复合：将血管脱细胞基质和真皮脱细胞基质微颗粒按重量比在溶剂中分散均匀并冻干，获得脱细胞基质复合材料。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述脱细胞液选自TritonX‑100、羟乙基哌嗪乙磺酸、聚乙二醇辛基苯基醚、脱氧胆酸钠、十二烷基氨基丙酸钠或脂肪醇聚氧乙烯醚中的至少一种；优选的，所述脱细胞液的浓度为0.1％～1％，在摇床上震荡4‑24h。5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述酶溶液选自核酸酶、胰酶或中性蛋白酶中的至少一种，酶浓度为0.5‑5％，所述降解处理的步骤为在摇床上震荡4‑24h。6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述清洗采用的清洗液选自磷酸盐缓冲液、无菌生理盐水、无菌去离子水或乙二胺四乙酸的至少一种。7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述的清洗步骤为：控制脱细胞基质与清洗液的质量比为1:0.5～1:5，在摇床上震荡0.5‑2h后，于500‑3000g下离心1‑10min除去上清液，重复上述过程1‑5次。8.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述消毒的消毒剂选自氢氧化钠、酒精、过氧乙酸或过氧化氢中的至少一种。9.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述微颗粒化的步骤为：将组织原材料和无菌生理盐水按质量比1:1‑1:5混匀后缓慢倒入胶体磨内物料仓，进行2000‑60000rpm，1‑10min的研磨，得到微颗粒的直径为1‑300微米。2CN113679889A权利要求书2/2页10.如权利要求1‑2任一项所述的脱细胞基质复合材料或权利要求3‑9任一项所述制备方法制得的脱细胞基质复合材料的应用，其特征在于，所述应用包括将该复合材料用于制备促进组织血管化的支架材料方面的应用。3