一种RARA-WIPF2融合基因及其应用和检测试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114134164A(43)申请公布日2022.03.04(21)申请号202111543138.2(22)申请日2021.12.16(71)申请人大连医科大学附属第二医院地址116027辽宁省大连市沙河口区中山路467号申请人上海交通大学医学院附属新华医院(72)发明人闫金松王海娜卢莹(74)专利代理机构上海盈盛知识产权代理事务所(普通合伙)31294代理人孙佳胤(51)Int.Cl.C12N15/62(2006.01)C12N15/11(2006.01)C12Q1/6886(2018.01)C12Q1/686(2018.01)权利要求书1页说明书5页序列表2页附图3页(54)发明名称一种RARA-WIPF2融合基因及其应用和检测试剂盒(57)摘要本发明提供一种RARA‑WIPF2融合基因及其应用和检测试剂盒，所述融合基因序列如SEQIDNO.1所示。本发明首先发现、鉴定了急性髓细胞白血病中存在新融合基因RARA‑WIPF2，该融合基因丰度与疾病进展阶段密切相关，可以作为急性髓细胞白血病的特异性分子标志物，进而开发了一款临床上可用于诊断、监测患者微小残留病(MRD)的试剂盒。试剂盒利用Taqman探针实时荧光PCR对急性髓细胞白血病患者体内RARA‑WIPF2融合基因进行绝对定量，其检测特异性好、灵敏度高、方法简便高效、成本低廉，能够满足临床上的诊疗需求。CN114134164ACN114134164A权利要求书1/1页1.一种RARA‑WIPF2融合基因，其特征在于，所述融合基因序列如SEQIDNO.1所示。2.权利要求1所述RARA‑WIPF2融合基因在制备急性髓细胞白血病诊断和/或监测制剂或试剂盒中的应用。3.一种急性髓细胞白血病诊断和/或监测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有检测权利要求1所述RARA‑WIPF2融合基因或检测其表达产物的试剂。4.根据权利要求3所述急性髓细胞白血病诊断和/或监测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括上游引物、下游引物、Taqman探针、内参、PCR反应缓冲液、阳性对照和阴性对照；所述上游引物的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示；所述下游引物的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示；所述Taqman探针的核苷酸序列如SEQIDNO.4所示。5.根据权利要求4所述急性髓细胞白血病诊断和/或监测试剂盒，其特征在于，所述Taqman探针的5’端标记有FAM基团，所述探针的3’端标记有TAMRA基团。6.根据权利要求4所述急性髓细胞白血病诊断和/或监测试剂盒，其特征在于，所述内参中包含内参上游引物，内参下游引物和内参探针；所述内参上游引物的核苷酸序列如SEQIDNO.5所示；所述内参下游引物的核苷酸序列如SEQIDNO.6所示；所述内参探针的核苷酸序列如SEQIDNO.7所示。7.一种非疾病诊断目的的检测权利要求1所述RARA‑WIPF2融合基因的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取人血液样本中的总RNA，将RNA反转为cDNA作为待测样品；(2)配置PCR反应液，再分别加入待测样品，阳性对照和阴性对照；(3)实时荧光PCR仪上检测，反应条件：95℃预变性10min；95℃15s，60℃1min，反应40个循环，荧光信号于60℃时采集；其中所述PCR反应液包括上游引物、下游引物、Taqman探针、内参、PCR反应缓冲液、阳性对照和阴性对照；所述上游引物的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示；所述下游引物的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示；所述Taqman探针的核苷酸序列如SEQIDNO.4所示。2CN114134164A说明书1/5页一种RARA‑WIPF2融合基因及其应用和检测试剂盒技术领域[0001]本发明涉及生物医学技术领域，尤其涉及一种急性髓细胞白血病融合基因及其应用和检测试剂盒。背景技术[0002]急性髓细胞白血病(AML)是成人中最常见的急性白血病，是造血系统中髓系原始细胞克隆性恶性增殖性疾病。AML预后差，死亡率高，其5年总生存率低于50％，尤其在老年患者中只有20％。染色体易位例如AML1‑ETO、CBFB‑MYH11等是AML中常见的细胞遗传学改变，作为分子标志物对AML的诊断、预后和监测个体治疗反应已在临床有广泛应用。然而，AML属于高度异质性的疾病，尚有很高比例患者缺乏分子标志物，对临床诊断和治疗提出了挑战。因此在AML患者中发现新分子标志物可以估计疾病的严重程度并预测患者的长期治疗结果，具有重要意义。[0003]RARA(RetinoicAcidReceptorAlpha)基因编码视黄酸受体α，是调控细胞分化的重要转录因子。RARA与RXR形成异源二聚体与其配体(全反式或9‑顺式视黄酸)结合后，