一种PAX5-GSE1融合基因及其应用和检测试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114214344A(43)申请公布日2022.03.22(21)申请号202111543150.3(22)申请日2021.12.16(71)申请人大连医科大学附属第二医院地址116027辽宁省大连市沙河口区中山路467号申请人上海交通大学医学院附属新华医院(72)发明人王海娜闫金松卢莹(74)专利代理机构上海盈盛知识产权代理事务所(普通合伙)31294代理人孙佳胤(51)Int.Cl.C12N15/62(2006.01)C12Q1/6886(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书5页序列表4页附图3页(54)发明名称一种PAX5-GSE1融合基因及其应用和检测试剂盒(57)摘要本发明提供一种PAX5‑GSE1融合基因及其应用和检测试剂盒，所述融合基因序列如SEQIDNO.1所示。本发明首先发现、鉴定了急性淋巴细胞白血病中存在新融合基因PAX5‑GSE1，该融合基因丰度与疾病进展阶段密切相关，可以作为急性淋巴细胞白血病的特异性分子标志物，进而开发了一款临床上可用于诊断、监测患者微小残留病(MRD)的试剂盒。试剂盒利用Taqman探针实时荧光PCR对急性淋巴细胞白血病患者体内PAX5‑GSE1融合基因进行绝对定量，其检测特异性好、灵敏度高、方法简便高效、成本低廉，能够满足临床上的诊疗需求。CN114214344ACN114214344A权利要求书1/1页1.一种PAX5‑GSE1融合基因，其特征在于，所述融合基因序列如SEQIDNO.1所示。2.权利要求1所述PAX5‑GSE1融合基因在制备急性淋巴细胞白血病诊断和/或监测制剂或试剂盒中的应用。3.一种急性淋巴细胞白血病诊断和/或监测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有检测权利要求1所述PAX5‑GSE1融合基因或检测其表达产物的试剂。4.根据权利要求3所述急性淋巴细胞白血病诊断和/或监测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括上游引物、下游引物、Taqman探针、内参、PCR反应缓冲液、阳性对照和阴性对照；所述上游引物的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示；所述下游引物的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示；所述Taqman探针的核苷酸序列如SEQIDNO.4所示。5.根据权利要求4所述急性淋巴细胞白血病诊断和/或监测试剂盒，其特征在于，所述Taqman探针的5’端标记有FAM基团，所述探针的3’端标记有TAMRA基团。6.根据权利要求4所述急性淋巴细胞白血病诊断和/或监测试剂盒，其特征在于，所述内参中包含内参上游引物，内参下游引物和内参探针；所述内参上游引物的核苷酸序列如SEQIDNO.5所示；所述内参下游引物的核苷酸序列如SEQIDNO.6所示；所述内参探针的核苷酸序列如SEQIDNO.7所示。7.一种非疾病诊断目的的检测权利要求1所述PAX5‑GSE1融合基因的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取人血液样本中的总RNA，将RNA反转为cDNA作为待测样品；(2)配置PCR反应液，再分别加入待测样品，阳性对照和阴性对照；(3)实时荧光PCR仪上检测，反应条件：95℃预变性10min；95℃15s，60℃1min，反应40个循环，荧光信号于60℃时采集；其中所述PCR反应液包括上游引物、下游引物、Taqman探针、内参、PCR反应缓冲液、阳性对照和阴性对照；所述上游引物的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示；所述下游引物的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示；所述Taqman探针的核苷酸序列如SEQIDNO.4所示。2CN114214344A说明书1/5页一种PAX5‑GSE1融合基因及其应用和检测试剂盒技术领域[0001]本发明涉及生物医学技术领域，尤其涉及一种急性淋巴细胞白血病融合基因及其应用和检测试剂盒。背景技术[0002]急性淋巴细胞白血病(ALL)是最常见的血液恶性肿瘤之一，约占成人急性白血病的15％～25％，占儿童白血病的70％以上。多药化疗方案是目前ALL的一线治疗方法，其次是造血干细胞移植。近几十年，由于分子靶向个性化治疗，儿童5年无事件生存率从不到10％增加到约90％。尽管如此，还有大约20％的儿童和超过50％的成人病例会出现复发，并出现耐药性、治疗失败和死亡。因此，监测微小残留病变(MRD)对评估治疗反应并指导临床方案至关重要。[0003]目前，MRD监测的经典技术是流式细胞术和聚合酶链反应(PCR)。MRD监测需要准确性和灵敏度(≤10‑4)，而PCR技术灵敏度则达到10‑6，从而找到肿瘤细胞的高度特异性标志物，例如异常免疫表型、特异性分子标志物等。其中最有代表性的是融合基因BCR‑ABL1在ALL患者中已成为临床常规监测手段，并且针对该融合基因的靶向药