他克莫司软膏透皮试验检测方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114965722A(43)申请公布日2022.08.30(21)申请号202110207037.1G01N30/72(2006.01)(22)申请日2021.02.24(71)申请人华北制药集团新药研究开发有限责任公司地址052165河北省石家庄市经济技术开发区海南路98号(72)发明人王会娟祝仕清马苗锐安兰兰刘素彦王晓红刘月张涛赵静赵伟孙莉朱秀良孔德清(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)G01N30/06(2006.01)G01N30/34(2006.01)G01N30/36(2006.01)G01N30/54(2006.01)权利要求书2页说明书7页附图3页(54)发明名称他克莫司软膏透皮试验检测方法(57)摘要本发明提供一种检测他克莫司软膏透皮试验中他克莫司的皮面残留量、皮内滞留量、皮肤透过量的样品的前处理方法，包括下列步骤：选择乙醇水溶液作为透皮介质进行透皮试验；进行皮面、皮内残留药物的样品前处理：包括有机溶剂冲洗、加热至熔融/乳化均质粉碎、超声提取、离心得提取液，然后将提取液转移定容，过滤，加入内标制得待测溶液。还提供一种液‑质联用快速检测低浓度他克莫司的方法，采用超高效液相色谱—三重四级杆质谱联用仪，对他克莫司软膏透皮试验中他克莫司的皮面残留量、皮内滞留量、皮肤透过量进行检测。本发明用于检测皮上、皮内、透皮的样品中含有的他克莫司，干扰性小、检出限低、灵敏度高、重现性好。CN114965722ACN114965722A权利要求书1/2页1.一种检测他克莫司软膏透皮试验中他克莫司的皮面残留量、皮内滞留量、皮肤透过量的样品的前处理方法，其特征在于，包括下列步骤：(1)选择乙醇水溶液作为接收介质进行透皮试验；(2)对皮面、皮内及透过样品进行前处理；皮面样品的前处理方法包括：溶剂冲洗、加热熔融、超声、离心、转移定容、过滤、加入内标，得皮面残留量待测溶液；皮内样品前处理方法包括：离体皮肤加溶剂粉碎、超声、离心、转移定容、过滤、加入内标，得皮内滞留量待测溶液；透过样品的前处理方法包括：接收液过滤、加入内标，得皮肤透过量待测溶液。2.根据权利要求1所述的检测他克莫司软膏透皮试验中他克莫司的皮面残留量、皮内滞留量、皮肤透过量的样品的前处理方法，其特征在于，所述步骤(1)中接收介质为20~30%乙醇水溶液。3.根据权利要求1所述的检测他克莫司软膏透皮试验中他克莫司的皮面残留量、皮内滞留量、皮肤透过量的样品的前处理方法，其特征在于，所述步骤(2)中皮面、皮内样品前处理方法所用溶剂为乙腈。4.根据权利要求3所述的检测他克莫司软膏透皮试验中他克莫司的皮面残留量、皮内滞留量、皮肤透过量的样品的前处理方法，其特征在于，所述步骤(2)中皮面样品前处理方法中药膏与乙腈的比例为1g：60~100ml。5.根据权利要求1所述的检测他克莫司软膏透皮试验中他克莫司的皮面残留量、皮内滞留量、皮肤透过量的样品的前处理方法，其特征在于，所述步骤(2)皮内样品前处理方法中单位扩散面积的溶剂用量2为4ml~8ml/cm。6.根据权利要求1所述的检测他克莫司软膏透皮试验中他克莫司的皮面残留量、皮内滞留量、皮肤透过量的样品的前处理方法，其特征在于，所述步骤(2)皮内样品前处理方法中皮肤的粉碎中使用高剪切分散乳化机，其转速为10000~30000rpm。7.根据权利要求1所述的检测他克莫司软膏透皮试验中他克莫司的皮面残留量、皮内滞留量、皮肤透过量的样品的前处理方法，所述内标为他克莫司的类似物、环孢素或环孢素类似物。8.一种液‑质联用快速检测他克莫司软膏透皮试验中他克莫司的皮面残留量、皮内滞留量、皮肤透过量的分析方法，其特征在于，采用超高效液相‑三重四级杆质谱联用仪，对权利要求1~7任一所述方法所获得皮面残留量、皮内滞留量及皮肤透过量的待测溶液进行他克莫司的检测，高效液相色谱的检测条件为：1）柱温为40℃~80℃；2）梯度洗脱，有机溶剂为乙腈或甲醇，有机溶剂所占比例为25%~95%，流动相中添加或不添加挥发性酸和/或挥发性盐。9.根据权利要求8所述的液‑质联用快速检测他克莫司软膏透皮试验中他克莫司的皮面残留量、皮内滞留量、皮肤透过量的分析方法，其特征在于，高效液相色谱的检测条件为：1）柱温为60℃；2）梯度洗脱，有机溶剂为乙腈，洗脱浓度为：有机溶剂初始所占比例为50%、7分钟时增2CN114965722A权利要求书2/2页至60%、9分钟时增至95%。10.根据权利要求9所述的液‑质联用快速检测他克莫司软膏透皮试验中他克莫司的皮面残留量、皮内滞留量、皮肤透过量的分析方法，其特征在于，高效液相色谱的检测条件为：色谱柱：WatersAcquityUPLCBEHC18柱，2.1mm×50mm，