一种降低D-阿洛酮糖-3-差向异构酶酶液酶活力损失的方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115074350A(43)申请公布日2022.09.20(21)申请号202210964251.6(22)申请日2022.08.12(71)申请人保龄宝生物股份有限公司地址251200山东省德州市禹城市禹城国家高新技术产业开发区东外环路1号(72)发明人吴怀祥李克文栾庆民陈雪薛雅莺张乐高蕾蕾张俊瑶森茂治(74)专利代理机构济南泉城专利商标事务所37218专利代理师张春连(51)Int.Cl.C12N9/90(2006.01)C12N9/96(2006.01)权利要求书1页说明书4页(54)发明名称一种降低D-阿洛酮糖-3-差向异构酶酶液酶活力损失的方法(57)摘要本发明公开了一种降低D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶酶液酶活力损失的方法，属于制糖技术领域。将D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶酶液进行离心，离心后的去除上清液得发酵菌体，发酵菌体复溶后进行均质操作释放出胞内菌体，然后进一步离心，保留上清液，上清液中加入MgSO4或Na2CO3。本发明处理后的D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶酶液仍具有较高的活性，并且酶活力下降到70%的时间延长了四倍，色值降低，电导降低，加入MgSO4或Na2CO3，显著地降低了酶活的损失，有利于D‑阿洛酮糖的后提纯工艺，并提高其制备D‑阿洛酮糖的生产效率。CN115074350ACN115074350A权利要求书1/1页1.一种降低D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶酶液酶活力损失的方法，其特征在于，将D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶酶液进行离心，离心后得发酵菌体，发酵菌体复溶后进行均质操作释放出胞内菌体，然后进一步离心，上清液中加入MgSO4或Na2CO3；所述的D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶酶液为枯草芽孢杆菌发酵后得到的酶液，枯草芽孢杆菌编号为blb‑12‑B，于2021年12月08日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.24054。2.根据权利要求1所述的降低D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶酶液酶活力损失的方法，其特征在于，所述的MgSO4在上清液中的浓度为0.1mM，所述的Na2CO3在上清液中的浓度为100mM。3.根据权利要求1所述的降低D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶酶液酶活力损失的方法，其特征在于，所述的均质，运行温度为8‑10℃，运行压力为800‑900bar。4.根据权利要求1所述的降低D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶酶液酶活力损失的方法，所述的复溶采用HEPES溶液。2CN115074350A说明书1/4页一种降低D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶酶液酶活力损失的方法技术领域[0001]本发明属于制糖技术领域，具体涉及一种降低D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶酶液酶活力损失的方法。背景技术[0002]随着经济水平的提高，居民的膳食结构发生变化，肥胖、糖尿病、高血糖、高血脂等慢性病在全球范围内大流行，因此，人们在饮食中越来越注重糖分的“健康摄取”。D‑阿洛酮糖为普遍公认安全食品(Generallyregardedassafe，GRAS)，并可作为食品或食品添加剂的组成成分。D‑阿洛酮糖主要来源于少部分植物和少数细菌，其口感接近蔗糖，甜度相当于蔗糖70%，热量相当于蔗糖的0.3%，可作为食品中蔗糖理想的替代品，与食物中的氨基酸或蛋白质发生美拉德反应，可改变产品品质，又具有低热量、调节血糖、抑制癌变、抗炎等有益人体健康的特殊功能。被美国食品导航网评价为最具潜力的蔗糖替代品。[0003]目前，D‑阿洛酮糖的产业化制备方法主要是生物法，且就目前的报道来看利用D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶制备D‑阿洛酮糖的转化率达到33%以上。但D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶液（发酵液）储存不稳定，易失活，且色值大、电导率高，增加了工业化生产的成本。因此，增加酶液储存稳定性，降低色值或电导就极有意义。发明内容[0004]针对现有技术中存在的D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶酶液储存不稳定，易失活，且色值大、电导率高的问题，本发明提供了一种降低D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶酶液酶活力损失的方法，处理后的D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶酶液仍具有较高的活性，并且酶活力下降到70%的时间延长了四倍，色值降低，电导降低，有利于D‑阿洛酮糖的后提纯工艺，并提高其生产效率。[0005]本发明通过以下技术方案实现：一种降低D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶酶液酶活力损失的方法，将D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶酶液进行离心，离心后得发酵菌体，发酵菌体复溶后进行均质操作释放出胞内菌体，然后进一步离心，上清液中加入MgSO4或Na2CO3；所述的D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶酶液为枯草芽孢杆菌发酵后得到的酶液，枯草芽孢杆菌编号为blb‑12‑B，于2021年12月08日保藏于中国微生物菌种保藏管理委