一种高底物转化率的D-阿洛酮糖3-差向异构酶及其固定化方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114958815A(43)申请公布日2022.08.30(21)申请号202210475571.5C12N11/089(2020.01)(22)申请日2022.04.29C12N11/091(2020.01)A23L33/17(2016.01)(71)申请人西北工业大学A61K38/52(2006.01)地址710072陕西省西安市友谊西路127号A61P3/04(2006.01)(72)发明人牛卫宁何伟娟王岩雄李恒C12R1/19(2006.01)王晶武彦君甘海胜贾冠雅朱志龙(74)专利代理机构西安维赛恩专利代理事务所(普通合伙)61257专利代理师刘艳霞(51)Int.Cl.C12N9/90(2006.01)C12N15/61(2006.01)C12N15/70(2006.01)C12N1/21(2006.01)权利要求书1页说明书9页序列表1页附图6页(54)发明名称一种高底物转化率的D-阿洛酮糖3-差向异构酶及其固定化方法(57)摘要本发明公开了本发明的目的是提供一种高底物转化率的D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶及其固定化方法，该高底物转化率的D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶其氨基酸序列如SEQIDNo.2所示，其底物转化率高，经固定化后，具有较高的操作稳定性。CN114958815ACN114958815A权利要求书1/1页1.一种D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶突变体酶P37H，其特征在于，其氨基酸序列如SEQIDNo.2所示。2.一种D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶突变体酶P37H的编码基因，其特征在于，为权利要求1所述的种D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶突变体酶P37H的编码基因经大肠杆菌表达，其核苷酸序列如SEQIDNo.1所示。3.一种重组表达载体，其特征在于，由权利要求2所述的一种D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶突变体酶P37H的编码基因构建而成。4.一种基因工程菌，其特征在于，由权利要求3所述的一种重组表达载体制备而成。5.一种固定化D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶突变体酶P37H，其特征在于，由权利要求1所述的固定D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶突变体P37H负载于环氧树脂或氨基树脂载体上制备而得。6.如权利要求5所述的一种固定化D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶突变体酶P37H，其特征在于，所述固定D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶突变体P37H与树脂载体的质量比为5～40。7.如权利要求6所述的一种固定化D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶突变体酶P37H的制备方法，其特征在于，该制备方法如下：将经戊二醛活化的氨基树脂中加入D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶突变体酶P37H溶液，浸泡即得。8.如权利要去1所述的一种D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶突变体酶P37H在减肥药品或食品中的应用。2CN114958815A说明书1/9页一种高底物转化率的D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶及其固定化方法技术领域[0001]本发明属于酶工程技术领域，具体涉及一种高底物转化率的D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶及其固定化方法。背景技术[0002]D‑阿洛酮糖是一种稀有糖，甜度是蔗糖的70％。D‑阿洛酮糖在动物体内几乎不产生任何热量，在抑制肥胖、降血糖等方面具有潜在功能。根据D‑阿洛酮糖的这些特性让其在食品、医药、保健品等领域具有极大的应用潜力。随着人们对健康饮食、健康生活质量关注度的持续增长，D‑阿洛酮糖的需求量急速增加。[0003]近年来，越来越多的可以催化D‑果糖和D‑阿洛酮糖之间的相互转化的DPE酶逐渐被人们发现，DPE酶催化D‑果糖和D‑阿洛酮糖之间的相互转化时，在反应过程中无需添加其他物质，由于其只有一步反应，反应后副产物少，有利于降低生产成本，使后续D‑阿洛酮糖的分离更加方便，是目前最理想的大规模工业化生产D‑阿洛酮糖的方法。[0004]目前发现的D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶的底物转化率都不高，稳定性差，其中底物转化率最高的DPE酶也仅为33％。高效的生物催化剂对于工业生产至关重要，因此，开发具有高底物转化率的DPE酶，对工业生产D‑阿洛酮糖具有重要价值。发明内容[0005]本发明的目的是提供一种高底物转化率的D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶及其固定化方法，D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶的底物转化率高，经固定化后，具有较高的操作稳定性。[0006]本发明采用以下技术方案：一种D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶突变体酶P37H，其氨基酸序列如SEQIDNo.2所示。[0007]一种D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶突变体酶P37H的编码基因，为上述的种D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶突变体酶P37H的编码基因经大肠杆菌表达，其核苷酸序列如SEQIDNo.1所示。[0008]一种重组表达载体，由上述的一种D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶突变体酶P37H的编码基因构建而成。[0009