CHO-S细胞残留蛋白检测试剂盒及其制备方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115144597A(43)申请公布日2022.10.04(21)申请号202210770359.1(22)申请日2022.06.30(71)申请人重庆智翔金泰生物制药股份有限公司地址400000重庆市巴南区国际生物城麻柳大道699号(72)发明人常志远边琳张鑫王威(74)专利代理机构重庆强大凯创专利代理事务所(普通合伙)50217专利代理师伍琴琴(51)Int.Cl.G01N33/68(2006.01)G01N33/58(2006.01)G01N33/531(2006.01)G01N33/535(2006.01)权利要求书1页说明书12页附图14页(54)发明名称CHO-S细胞残留蛋白检测试剂盒及其制备方法(57)摘要本发明涉及生物医学分析领域，公开了CHO‑S细胞残留蛋白检测试剂盒及其制备方法，包括包被有抗HCP蛋白抗体的酶标板、生物素标记的IgG、辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素和辅助制剂。该试剂盒的使用方法，包括如下步骤S1：用CHOHCP抗体包被酶标板；S2：向包被后的酶标板中加入待检测样品和标准品溶液，孵育、洗涤；S3：向S2洗涤后的酶标板中加入生物素标记的IgG，孵育、洗涤；S4：向S3洗涤后的酶标板中加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素，孵育、洗涤；S5：向S4洗涤后的酶标板中加入显色液显色，孵育，加入终止液终止反应，于450nm波长下测定吸收度值。该试剂盒弥补了HCP专用检测试剂盒的空白，且对HCP检测专属性高、检测精密度高。CN115144597ACN115144597A权利要求书1/1页1.CHO‑S细胞残留蛋白检测试剂盒，其特征在于：包括包被有抗HCP蛋白抗体的酶标板、生物素标记的IgG、辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素和辅助制剂。2.根据权利要求1所述的CHO‑S细胞残留蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述生物素标记的IgG按照1:200～6400的比例稀释后使用，稀释液为pH7.4的含0.2％～1％BSA磷酸盐‑吐温缓冲液。3.根据权利要求2所述的CHO‑S细胞残留蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述辅助制剂包括：pH9.6的碳酸盐缓冲液、TMB显色液、终止液，终止液为硫酸或盐酸。4.根据权利要求1‑3任意一项所述的CHO‑S细胞残留蛋白检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤I：取CHO‑S宿主细胞蛋白免疫原，用PBS透析过夜，并定量检测总蛋白量；步骤II：将部分HCP免疫原在兔子身上进行免疫接种产生抗体，其余HCP免疫原进行冻干处理并作为标准品；步骤III：定量检测总蛋白量后，调整HCP免疫原蛋白浓度至2～20mg/mL，低温下保存备用；步骤IV：使用步骤II所得抗体进行扩大免疫，得抗HCP蛋白抗体，并在96孔板上包被HCP抗体；步骤V：抗体生物素标记，IgG用PBS搅拌透析过夜后，在冰面上用生物素标记；更换新鲜的PBS，继续透析，得生物素标记的IgG，于低温下储存备用；步骤VI：检测应用。5.根据权利要求4所述的CHO‑S细胞残留蛋白检测试剂盒的制备方法，其特征在于：步骤I中，用PBS透析过夜的条件为在4℃下搅拌24h。6.根据权利要求5所述的CHO‑S细胞残留蛋白检测试剂盒的制备方法，其特征在于：步骤IV中，扩大免疫接种动物为兔，免疫接种采用多部位肌肉注射，第一针时，每1mL免疫原与1mL弗氏完全佐剂混合；后续针次，每1mL免疫原与1mL弗氏非完全佐剂混合；免疫接种程序持续98天。7.根据权利要求6所述的CHO‑S细胞残留蛋白检测试剂盒的制备方法，其特征在于：步骤V中，生物素与IgG的摩尔比为5～20:1。8.一种权利要求1‑3任意一项所述的CHO‑S细胞残留蛋白检测试剂盒的使用方法，其特征在于，包括如下步骤：S1：用CHO‑SHCP抗体包被酶标板；S2：向包被后的酶标板中加入待检测样品和标准品溶液，孵育、洗涤；S3：向S2洗涤后的酶标板中加入生物素标记的IgG，孵育、洗涤；S4：向S3洗涤后的酶标板中加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素，孵育、洗涤；S5：向S4洗涤后的酶标板中加入显色液显色，孵育，加入终止液终止反应，于450nm波长下测定吸收度值。9.根据权利要求8所述的CHO‑S细胞残留蛋白检测试剂盒的使用方法，其特征在于：步骤S5中，显色液为TMB或OPD。2CN115144597A说明书1/12页CHO‑S细胞残留蛋白检测试剂盒及其制备方法技术领域[0001]本发明涉及生物医学分析领域，具体涉及一种用于CHO‑S细胞残留蛋白检测试剂盒及其制备方法。背景技术[0002]CHO细胞全称：中国仓鼠卵巢细胞(ChineseHamsterOvarian,CHO)，该细胞表达的蛋白最接近于天然蛋白分子，产物胞外分泌但很少分泌自身内源蛋