一种前白蛋白检测试剂盒及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102788881A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102788881A(43)申请公布日2012.11.21(21)申请号201210292025.4(22)申请日2012.08.16(71)申请人北京恩济和生物科技有限公司地址100083北京市海淀区学清路16号学知轩1801室(72)发明人谢兵(51)Int.Cl.G01N33/68(2006.01)G01N33/577(2006.01)权利要求书权利要求书11页页说明书说明书33页页(54)发明名称一种前白蛋白检测试剂盒及其制备方法(57)摘要一种前白蛋白的检测试剂盒。试剂盒盒体内包括：试剂R1：缓冲液、聚乙二醇、叠氮钠、乙二胺四乙酸钠、牛血清白蛋白；试剂R2：缓冲液、结合有前白蛋白单克隆抗体的乳胶粒子、吐温-20、叠氮钠、乙二胺四乙酸钠、牛血清白蛋白。通过将样品与试剂按一定的体积比混合，使之发生一系列反应，再将反应物置于半/全自动生化分析仪下，检测主波长340nm处吸光度变化的速度，从而测算出前白蛋白的浓度大小。本试剂盒具有准确、稳定、方便的优点。CN10278ACN102788881A权利要求书1/1页1.一种前白蛋白检测试剂盒，其组成为：试剂R1、试剂R2；其中：a、试剂R1包括：200-220mmol/LTris缓冲液、5-10mmol/L聚乙二醇、1-5mmol/L叠氮钠、1-5mmol/L乙二胺四乙酸钠、1-5mmol/L牛血清白蛋白；b、试剂R2：200-220mmol/LTris缓冲液、结合有前白蛋白单克隆抗体的乳胶粒子、1-5mmol/L吐温-20、0.5-3mmol/L叠氮钠、1-5mmol/L乙二胺四乙酸钠、1-5mmol/L牛血清白蛋白。2.权利要求1的试剂盒，其特征在于：试剂R2中的前白蛋白单克隆抗体的乳胶粒子的制备方法为：10.5mg/ml的前白蛋白单克隆抗体与10%的乳胶颗粒（直径50-100nm），加入到200-220mmol/LTris缓冲液中，震荡反应4小时，离心去上清，再用200-220mmol/LTris缓冲液稀释至0.5%，并加入0.1-0.3mmol/L叠氮钠。3.上述试剂盒的制备和操作方法，主要步骤为：（a）按下列比例配制好试剂：试剂R1：Tris缓冲液200-220mmol/L聚乙二醇5-10mmol/L叠氮钠1-5mmol/L乙二胺四乙酸钠1-5mmol/L牛血清白蛋白1-5mmol/L；试剂R2：Tris缓冲液200-220mmol/L结合有前白蛋白单克隆抗体的乳胶粒子3.5-5%（v/v）吐温-201-5mmol/L叠氮钠0.5-3mmol/L乙二胺四乙酸钠1-5mmol/L牛血清白蛋白1-5mmol/L；（b）将试剂与待测样本按一定比例混合，使其完全反应；（c）用半/全自动生化分析仪测定吸光度变化值；（d）根据吸光度变化值计算出样本中前白蛋白的浓度。4.权利要求3的方法，其特征在于，被测样品与试剂比例应控制在1：125到1：135之间。5.权利要求3的方法，其特征在于，反应温度为37（±1）℃。6.权利要求3的方法，其特征在于，反应时间为10分钟。7.权利要求3的方法，其特征在于，用半/全自动生化分析仪检测的波长为340nm。2CN102788881A说明书1/3页一种前白蛋白检测试剂盒及其制备方法技术领域[0001]本发明属于生物医药技术领域，具体地说涉及一种检测人前白蛋白的检测试剂盒。背景技术[0002]血清前白蛋白（PA）是由4个相同亚基组成的四聚体，分子量为55.0kD。具有重要的生理活性。它与甲状腺素结合球蛋白（TBG）和白蛋白一起，协同参与甲状腺素的转运。[0003]PA在甲状腺激素运输中的作用仅次于TBG。TBG负责转运甲状腺素总量的70%～75%，PA则转运15%～20%，而ALB转运的甲状腺素更少些（10%）。在正常生理条件下，血浆甲状腺素几乎全部（99.98%）通过与这三种蛋白质结合运转，到达靶细胞。[0004]PA的另一重要功能是协助视黄醇结合蛋白（RBP）转运视黄醇。当机体需要维生素A时，贮存在肝脏内的视黄醇酯被水解，游离的视黄醇与RBP结合，被分泌到血循环中，再与PA结合，所形成的视黄醇RBP-PA大分子结合物，通过循环转运到有特异性RBP受体结合部位的靶组织中，一进入靶细胞，视黄醇-RBP-PA结合物即分离。[0005]急性、亚急性重症肝炎起病后一周内，PA的下降变化远较ALB敏感。各型肝炎患者血清PA水平均有不同程度的降低，以肝硬化和重症肝炎降低最显著。因此，血清中的PA可作为中毒肝病的早期诊断指标和观察肝脏功能恢复的灵敏指标。[0006]前白蛋白测定方法很多，包括：(一)放射免疫测定法(RIA)、(二)酶联免疫测定法(ELISA)