用于检测CHO细胞基因组DNA的组合物、试剂盒及方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115418394A(43)申请公布日2022.12.02(21)申请号202210920865.4(22)申请日2022.08.02(71)申请人天根生化科技（北京）有限公司地址100192北京市海淀区西小口路66号东升科技园（北领地）C7-3(72)发明人张双宇刘玉方李晓晨孙克非(74)专利代理机构北京清亦华知识产权代理事务所(普通合伙)11201专利代理师于腾昊(51)Int.Cl.C12Q1/6851(2018.01)C12Q1/6888(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书16页附图4页(54)发明名称用于检测CHO细胞基因组DNA的组合物、试剂盒及方法(57)摘要本发明提出了用于检测CHO细胞基因组DNA的组合物、试剂盒及方法，该组合物包括引物和探针，所述引物包括：上游引物序列：5’‑CTCTGTGTAGCTTTGGAGCCTA‑3’(SEQIDNO:2)，下游引物序列：5’‑CCAGCACTCGGGAGGCA‑3’(SEQIDNO:3)；所述探针包括如下序列：5’‑ACTCACAGAGATCCGCCTGCC‑3’(SEQIDNO:4)。利用本发明提出的组合物可以排除Vero细胞、大鼠细胞、小鼠细胞、大肠杆菌细胞和人源细胞的基因组DNA的干扰，能够有效检测生物制品中残留CHO细胞基因组DNA，稳定检测灵敏度可达1fg。CN115418394ACN115418394A权利要求书1/1页1.一种组合物，其特征在于，包括引物和探针，所述引物包括：上游引物序列：5’‑CTCTGTGTAGCTTTGGAGCCTA‑3’(SEQIDNO:2)，下游引物序列：5’‑CCAGCACTCGGGAGGCA‑3’(SEQIDNO:3)；所述探针包括如下序列：5’‑ACTCACAGAGATCCGCCTGCC‑3’(SEQIDNO:4)。2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述探针进一步携带荧光基团；任选地，所述荧光基团选自下列中的至少之一：FAM、ROX、VIC、CY5、CY3、HEX、5‑TAMRA、TET和JOE。3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述探针的5’端标记荧光基团，3’端标记淬灭基团，任选地，所述探针5’端标记FAM荧光报告基团，3’端标记BHQ1淬灭基团。4.一种试剂盒，其特征在于，包含权利要求1‑3任一项所述的组合物。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，进一步包括下列中的至少一种：PCR缓冲液、盐离子、dNTPs、DNA聚合酶或者靶标核酸；任选地，进一步包括PCR增强剂；任选地，所述DNA聚合酶为Taq酶；任选地，所述盐离子为Mg2+。6.根据权利要求4或所述的试剂盒，其特征在于，进一步包括下列试剂中的至少一种：DNA提取试剂和核酸纯化试剂。7.一种检测CHO细胞基因组DNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：将待测样品在PCR扩增体系中进行扩增反应，所述PCR扩增体系中包括权利要求1‑3任一项所述的组合物或利用权利要求4‑6任一项所述的试剂盒配制的，其中，所述待测样品包括CHO细胞基因组DNA。8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述待测样品是以CHO细胞的形式提供的；任选地，所述待测样品预先经过CHO细胞基因组DNA提取处理；任选地，在PCR扩增体系中进行扩增反应，以便获得靶标核酸的CT值；以及基于所述靶标核酸的CT值，确定待测样品中CHO细胞基因组DNA的水平；任选地，所述靶标核酸包括SEQIDNO:1所示的核苷酸序列。9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述的PCR扩增体系包括权利要求1‑3任一项所述的组合物，其中，所述组合物中的上游引物序列、下游引物序列和探针的摩尔比为(4‑10)：(4‑10)：(3‑6)；优选地，所述上游引物序列、下游引物序列和探针的摩尔比为5：5：4。10.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增反应的条件依次为：90℃‑97℃、0.8‑1.5min，1个循环；90℃‑97℃、3‑10s，55‑65℃、10‑20s，38‑42个循环。2CN115418394A说明书1/16页用于检测CHO细胞基因组DNA的组合物、试剂盒及方法技术领域[0001]本发明涉及生物技术领域，具体地，涉及用于检测CHO细胞基因组DNA的组合物、试剂盒及方法，更具体地，设计一种组合物、试剂盒、检测CHO细胞基因组DNA的方法。背景技术[0002]CHO细胞，中国仓鼠卵巢细胞(Chinesehamsterovary)，由于具有无限增殖能力，可稳定传代百代以上，而成为目前生物工程上广泛使用的哺乳动物细胞系。现阶段，CHO细胞与大肠杆菌细胞被广泛用于人类疾病治疗和预防基因工