用于检测蜂蜜的组合物、试剂盒、检测方法及应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利(10)授权公告号(10)授权公告号CNCN103215373103215373B(45)授权公告日2014.11.05(21)申请号201310170812.6118卷摘要第2部分至982页表2.CristinaOlivieri等.TrackingPlant,(22)申请日2013.05.10Fungal,andBacterialDNAinHoney(73)专利权人中国检验检疫科学研究院Specimens.《JForensicSci》.2012,第57卷地址100123北京市朝阳区高碑店北路甲3(第1期),左栏第3段至226页左栏第号1段.(72)发明人吴亚君陈颖王斌刘鸣畅审查员武雪梅韩建勋(74)专利代理机构隆天国际知识产权代理有限公司72003代理人王芝艳吴小瑛(51)Int.Cl.C12Q1/68(2006.01)(56)对比文件CN102433322A,2012.05.02,全文.中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局.蜂蜜中转基因成分检测方法普通PCR方法和实时荧光PCR方法.《中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T2135-2008》.2008,1-9.I.Laube等.Developmentofprimerandprobesetsforthedetectionofplantspeciesinhoney.《FoodChemistry》.2012,第权利要求书1页权利要求书1页说明书8页说明书8页序列表3页序列表3页附图10页附图10页(54)发明名称用于检测蜂蜜的组合物、试剂盒、检测方法及应用(57)摘要本发明涉及用于蜂蜜中龙眼、荔枝、洋槐、油菜蜜源植物成分检测的寡核苷酸引物及探针，包含所述引物及探针的试剂盒，以及利用其检测蜂蜜中上述蜜源植物成分的方法。通过本发明，能够简单、快速、特异且灵敏地检测蜂蜜中的上述蜜源植物成分。CN103215373BCN103257BCN103215373B权利要求书1/1页1.用于通过实时荧光PCR方法鉴别蜂蜜中蜜源植物成分的组合物，所述组合物包含以下(1)至(4)中的引物和探针序列：(1)油菜特异性寡核苷酸引物对SEQIDNo.1和SEQIDNo.2以及探针SEQIDNo.3序列；(2)洋槐特异性寡核苷酸引物对SEQIDNo.4和SEQIDNo.5以及探针SEQIDNo.6序列；(3)荔枝和龙眼特异性寡核苷酸引物对SEQIDNo.7和SEQIDNo.8以及探针SEQIDNo.9序列；(4)龙眼特异性寡核苷酸引物对SEQIDNo.10和SEQIDNo.11以及探针SEQIDNo.12序列。2.根据权利要求1所述的组合物，其中，在探针的3’端连接有荧光淬灭基团，5’端连接有荧光报告基团。3.根据权利要求2所述的组合物，其中所述荧光淬灭基团为TAMRA，所述荧光报告基团为FAM。4.根据权利要求1-3中任一项所述的组合物，其中，蜜源植物为荔枝、龙眼、洋槐和油菜中的一种或多种。5.用于通过实时荧光PCR方法鉴别蜂蜜中蜜源植物成分的试剂盒，所述试剂盒包括权利要求1-4中任一项所述的组合物。6.鉴别蜂蜜中蜜源植物成分的实时荧光PCR检测方法，所述方法包括使用权利要求1-4中任一项所述的组合物或权利要求5所述的试剂盒。7.根据权利要求6所述的实时荧光PCR检测方法，其为Taqman荧光探针法。8.权利要求1-4中任一项所述的组合物或权利要求5所述的试剂盒在鉴别蜂蜜中蜜源植物成分中的应用。2CN103215373B说明书1/8页用于检测蜂蜜的组合物、试剂盒、检测方法及应用技术领域[0001]本发明属于生物技术领域，具体而言，本发明涉及用于检测蜂蜜中蜜源植物成分的寡核苷酸引物和探针，包含所述引物和探针的试剂盒，以及使用所述引物和探针或试剂盒检测蜂蜜中蜜源植物成分的方法。本发明还涉及所述引物和探针在检测蜂蜜中蜜源植物成分中的应用。背景技术[0002]蜂蜜，是蜜蜂采集植物的花蜜、分泌物或蜜露，与自身分泌物结合后，经充分酿造而成的天然甜味物质。蜜源植物种类繁多，如油菜蜜、槐花蜜、荆条蜜、枣花蜜、龙眼蜜、荔枝蜜等等。不同蜜源蜂蜜价格相差较大，高端价位如龙眼蜜和荔枝蜜，低端价位如油菜蜜等。蜂蜜掺假中一种较为普遍的做法是将低价蜜源蜂蜜掺入高价蜜源蜂蜜。针对这类掺假，传统的检测方法，如感官法、物理性状、化学成分分析等，由于受到生产、加工、贮藏条件影响存在很多不确定性。分子生物学技术通过检测植物物种特异性基因片段来判断蜜源，具有特异性强，灵敏度高，不易受环境条件干扰，结果稳定等优点。发明内容[0003]本发明的目的在于，简单、快速、特异且灵敏地检测蜂蜜中的荔枝、龙眼、洋槐、油菜蜜源植物成分。通过本发明，不仅能检测蜂蜜中花粉沉淀中提取的D