人抗苗勒氏管激素胶体金免疫层析检测试剂盒及方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105527447A(43)申请公布日2016.04.27(21)申请号201510917795.7(22)申请日2015.12.10(71)申请人南京沐美生物科技有限公司地址210000江苏省南京市六合区中山科技园科创大道9号D6栋108室(72)发明人陈明慧郝睿(74)专利代理机构北京华仲龙腾专利代理事务所(普通合伙)11548代理人黄玉珏(51)Int.Cl.G01N33/74(2006.01)G01N33/558(2006.01)权利要求书2页说明书7页附图3页(54)发明名称人抗苗勒氏管激素胶体金免疫层析检测试剂盒及方法(57)摘要本发明公开了一种人抗苗勒氏管激素胶体金免疫层析检测试剂盒及方法，其包括：试剂卡壳、设置在试剂卡壳内的底板、设置在底板一端的样本垫、一端与样本垫抵靠接触的胶金垫、一端与胶金垫另一端抵靠接触的检测垫、以及与检测垫另一端接触的吸收垫，其中胶金垫上包含胶体金纳米颗粒以及结合了鼠抗人AMH的第一抗体，而检测垫上分布了不重合的检测线和质控线，其中检测线上包含了鼠抗人AMH的第二抗体，质控线上包含了抗第一抗体的第三抗体。本发明能快速即时检测女性血清中AMH的浓度，从而用于评估女性卵巢中卵子的活性以及储存量，准确，快速，灵敏度高，无需专业人员操作，成本较低，便于推广使用。CN105527447ACN105527447A权利要求书1/2页1.一种人抗苗勒氏管激素胶体金免疫层析检测试剂盒，其特征在于其包括：试剂卡壳、设置在试剂卡壳内的底板、设置在底板一端的样本垫、一端与样本垫抵靠接触的胶金垫、一端与胶金垫另一端抵靠接触的检测垫、以及与检测垫另一端接触的吸收垫，其中胶金垫上包含胶体金纳米颗粒以及结合了鼠抗人AMH的第一抗体，而检测垫上分布了不重合的检测线和质控线，其中检测线上包含了鼠抗人AMH的第二抗体，质控线上包含了抗第一抗体的第三抗体。2.根据权利要求1所述的一种人抗苗勒氏管激素胶体金免疫层析检测试剂盒，其特征在于，所述第二抗体为只有在有AMH存在的情况下才和AMH及第一抗体特异性结合，而第三抗体在任何情况下都能和第一抗体结合。3.根据权利要求1所述的一种人抗苗勒氏管激素胶体金免疫层析检测试剂盒，其特征在于，所述样本垫和胶金垫至少部分重叠，而胶金垫和检测垫至少部分重合。4.根据权利要求1所述的一种人抗苗勒氏管激素胶体金免疫层析检测试剂盒，其特征在于，所述胶体金粒径为10-100nm，且胶体金颗粒的制备使用恒温回流加热法。5.根据权利要求1所述的一种人抗苗勒氏管激素胶体金免疫层析检测试剂盒，其特征在于其还包含胶体金读取仪，且胶体金读取仪的光密度扫描波长在450-550nm之间。6.根据权利要求1所述的一种人抗苗勒氏管激素胶体金免疫层析检测试剂盒，其特征在于：所述检测线靠近胶金垫一端，所述质控线靠近吸收垫一端，所述检测线和质控线相隔距离在0.5-1.5cm之间。7.根据权利要求6所述的一种人抗苗勒氏管激素胶体金免疫层析检测试剂盒，其特征在于，所述卡壳包括相互匹配并扣合的上下半卡壳，所述卡壳具有加样孔和观察孔，加样孔位于胶金垫和样本垫处并局部裸露样本垫，而观察孔位于检测垫上方并裸露检测线和质控线。8.一种人抗苗勒氏管激素胶体金免疫层析检测试剂盒的方法，其特征在于其包括：S1、制备胶体金纳米颗粒步骤；S2、胶体金标记抗人AMH抗体的制备步骤；S3、胶金垫的处理步骤；S4、样本垫的制备步骤；S5、检测垫上检测线及质控线的包被步骤；S6、人AMH胶体金免疫层析定量检测试剂盒的组装步骤。9.根据权利要求8所述的一种人抗苗勒氏管激素胶体金免疫层析检测试剂盒的方法，其特征在于其包括如下步骤：S1、制备胶体金纳米颗粒步骤：将氯金酸溶液还原成粒径为10-100nm的胶体金纳米颗粒，取100mL浓度为0.01％的氯金酸溶液，置于干净的回流圆底烧瓶中，200-250℃恒温回流油浴加热低速搅拌30min，达到沸腾状态，迅速一次性加入1.5mL浓度为1％的柠檬酸三钠溶液，继续恒温回流，高速搅拌，保持沸腾状态，溶液由浅黄-黑色-紫色-酒红色，颜色稳定后低速搅拌，保持10min，冷却至室温，获得胶体金纳米颗粒；S2、胶体金标记抗人AMH抗体的制备步骤：取10mL的胶体金纳米颗粒，用0.2M的碳酸钾缓冲溶液调节胶体金溶液的pH值；加入150μg的鼠抗人AMH第一抗体，搅拌1h；加入1mL浓度为5％-10％的BSA溶液，搅拌30min；最后加入1mL浓度为1％-5％的PEG-20000溶液，搅拌2CN105527447A权利要求书2/2页30min；4℃，8000rpm离心30min，去上清；加入1mL的重悬液复溶，得到免疫胶体金溶液，和人AMH特异性反应；S3、胶金