一种抗缪勒氏管激素的近红外荧光层析免疫定量检测试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109283343A(43)申请公布日2019.01.29(21)申请号201710602540.0(22)申请日2017.07.21(71)申请人上海吉宣生物科技有限公司地址201702上海市青浦区北青公路9138号1幢3层M区374室(72)发明人丁晓辉(74)专利代理机构上海光华专利事务所(普通合伙)31219代理人严晨许亦琳(51)Int.Cl.G01N33/74(2006.01)G01N33/68(2006.01)G01N33/58(2006.01)G01N33/558(2006.01)G01N33/533(2006.01)权利要求书2页说明书6页附图1页(54)发明名称一种抗缪勒氏管激素的近红外荧光层析免疫定量检测试剂盒(57)摘要本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种抗缪勒氏管激素的近红外荧光层析免疫定量检测试剂盒。本发明提供一种抗缪勒氏管激素检测试剂盒，包括位于背板上的试剂条，试剂条从加样端开始依次为加样垫片、玻璃纤维素片、硝酸纤维素膜和吸水垫片，所述玻璃纤维素片上包被有荧光素标记的第一抗AMH单克隆抗体和荧光素标记的鸡IgY抗体，所述硝酸纤维素膜上设有T1检测线、T2检测线和质控线，所述T1检测线上包被有第二抗AMH单克隆抗体，所述T2检测线上包被有AMH抗原，所述质控线上包被有羊抗鸡IgY抗体。本发明克服了现有技术的HOOK效应，极大的扩大了定量范围上限（线性区间），解决了现有技术高浓度样本误测局限。CN109283343ACN109283343A权利要求书1/2页1.一种抗缪勒氏管激素检测试剂盒，包括位于背板上的试剂条，试剂条从加样端开始依次为加样垫片、玻璃纤维素片、硝酸纤维素膜和吸水垫片，所述玻璃纤维素片上包被有荧光素标记的第一抗AMH单克隆抗体和荧光素标记的鸡IgY抗体，所述硝酸纤维素膜上设有T1检测线、T2检测线和质控线，所述T1检测线上包被有第二抗AMH单克隆抗体，所述T2检测线上包被有AMH抗原，所述质控线上包被有羊抗鸡IgY抗体。2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述荧光素为氟硼二吡咯荧光素(BODIPY)。3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述第一抗AMH单克隆抗体为兔源性抗AMH单克隆抗体。4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述第二抗AMH单克隆抗体为鼠源性抗AMH单克隆抗体。5.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述第一抗AMH单克隆抗体与第二抗AMH单克隆抗体为不同的抗体。6.如权利要求1-5任一权利要求所述的抗缪勒氏管激素检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：1)用缓冲液制备荧光物溶液，将AMH单克隆抗体1和鸡IgY抗体加入荧光物溶液中，制备获得免疫荧光复合物溶液；2)将步骤1)所得的免疫荧光复合物溶液喷点至玻璃纤维素片；3)用缓冲液制备羊抗鸡IgY溶液、AMH单克隆抗体2溶液和AMH抗原溶液；4)使用羊抗鸡IgY溶液、AMH单克隆抗体2溶液和AMH抗原溶液分别在硝酸纤维素膜上喷点C线、T1线和T2线；5)贴膜、切踩即得所述抗缪勒氏管激素检测试剂盒。7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，还包括如下技术特征中的一种或多种：A1)所述步骤1)中，分别将AMH单克隆抗体1和鸡IgY抗体加入两份不同的荧光物溶液中，反应完成后再将两份溶液混合；A2)所述步骤1)中，荧光物溶液中荧光物的浓度为1-20pmol/L；A3)所述步骤1)中，按照抗体目标终浓度为0.5-2mg/ml将抗体加入荧光物溶液；A4)所述步骤1)中，抗体加入荧光物溶液后，室温搅拌两小时以上；A5)所述步骤1)中，使用PBS缓冲液制备荧光物溶液，PBS缓冲液的pH＝6.8-7.2，浓度为0.01-0.05M；A6)所述步骤2)中，喷点时将溶液稀释至OD720＝2.0～4.0；A7)所述步骤2)中，使用PBS缓冲液稀释溶液，PBS缓冲液的pH＝6.8-7.2，浓度为0.01-0.05M；A8)所述步骤2)中，喷点量为2-5mg/ml；A9)所述步骤2)中，喷点后35-45℃烘干。8.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，还包括如下技术特征中的一种或多种：B1)所述步骤3)中，使用IgY溶液的终浓度为1.0-2.0mg/ml；B2)所述步骤3)中，AMH单克隆抗体2溶液的终浓度为1.0-2.0mg/ml；B3)所述步骤3)中，AMH抗原溶液的终浓度为1.0-2.0mg/ml；2CN109283343A权利要求书2/2页B4)所述步骤3)中，使用PBS缓冲液制备溶液，PBS缓冲液的pH＝6.8-7.2，浓度为0.01-0.05M；B5)所述步骤4)中，喷点量为1-3μl/cm；B6)所述步骤4)中，喷点后35-45℃烘干。3