用于检测抗缪勒氏管激素的胶体金免疫层析试纸条及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110702927A(43)申请公布日2020.01.17(21)申请号201911065630.6(22)申请日2019.11.04(71)申请人南京欧凯生物科技有限公司地址210000江苏省南京市江北新区浦滨路211号扬子科创中心一期A栋11层(72)发明人戴瞻(74)专利代理机构北京盛凡智荣知识产权代理有限公司11616代理人王翠(51)Int.Cl.G01N33/74(2006.01)G01N33/577(2006.01)G01N33/558(2006.01)权利要求书2页说明书6页附图1页(54)发明名称用于检测抗缪勒氏管激素的胶体金免疫层析试纸条及其制备方法(57)摘要一种用于检测抗缪勒氏管激素的胶体金免疫层析试纸条及其制备方法，由样品垫、标记垫、硝酸纤维素膜、吸水垫顺次搭接在PVC底板上构成，硝酸纤维素膜上包被的有划金线、检测线和质控线，其中划金线包被的是胶体金-抗AMH单克隆抗体1复合物，检测线上包被的是抗AMH单克隆抗体2，质控线上包被的是羊抗鼠多克隆抗体。本发明将胶体金-抗AMH单克隆抗体1耦连复合物直接包被在硝酸纤维素膜上，不仅提高了试纸条的精密度，也大大缩短了检测时间，实现了5分钟即可检测的突破，从而达到超快速定量检测AMH含量的目的。CN110702927ACN110702927A权利要求书1/2页1.一种用于检测抗缪勒氏管激素的胶体金免疫层析试纸条，包括PVC底板，其特征在于：还包括样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜及吸水垫；所述样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜及吸水垫顺次搭接置于所述PVC底板上；所述样品垫设置在所述PVC底板的一端上，且与所述PVC底板固定连接；所述样品垫的中心位置设置有样品滴入区；所述样品垫的一端搭设在所述金标垫上，所述金标垫与所述PVC底板固定连接，所述金标垫的底部远离样品垫的一端搭设在所述硝酸纤维素膜上，所述硝酸纤维素膜固定连接在PVC底板上，所述硝酸纤维素膜上包被有划金封闭液线、检测线和质控线，所述划金封闭液线、检测线和质控线沿水平方向平行设置；所述划金封闭液线包被有胶金体标记的抗AMH单克隆抗体1；所述检测线包被有与所述胶体金标记的AMH单克隆抗体1处于不同表位的另一种AMH单克隆抗体2，所述质控线包被有羊抗鼠IgG多克隆抗体；所述硝酸纤维素膜远离所述金标垫的一端设置有吸水垫，所述吸水垫的一端搭设在所述硝酸纤维素膜上，所述吸水垫固定连接在所述PVC底板上。2.根据权利要求1所述的用于检测抗缪勒氏管激素的胶体金免疫层析试纸条，其特征在于：所述胶体金为0.02％的大粒径胶体金，最大吸收峰处波长为528～530nm，吸光度为1.8～2.0A。3.根据权利要求1所述的用于检测抗缪勒氏管激素的胶体金免疫层析试纸条，其特征在于：所述划金封闭液的包被量为1～3μl/cm，胶体金标记AMH单克隆抗体1的标记比例为每ml胶体金抗体使用量为6-10μg，胶体金-AMH单克隆抗体1耦连复合物浓缩倍数为20-30倍，即每20-30ml胶体金浓缩至1ml，划金量为0.5-1.0μl/cm。4.根据权利要求1所述的用于检测抗缪勒氏管激素的胶体金免疫层析试纸条，其特征在于：所述硝酸纤维素膜检测线上包被的AMH单克隆抗体2的浓度为0.8-1.0mg/ml，包被量为1.0-1.5μL/cm；所述质控线上包被的羊抗鼠IgG多克隆抗体浓度为1.0-1.5mg/mL，包被量为1.0-1.5μL/cm。5.一种根据权利要求1所述的用于检测抗缪勒氏管激素的胶体金免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于：包括下列步骤：(1)胶体金溶液的制备①玻璃器皿的清洁：胶体金制备过程中使用的容器、烧杯要泡重铬酸钾-浓硫酸溶液处理6小时以上，然后用纯化水、超纯水依次反复冲洗，烘干备用；②溶液的配制：2％氯金酸：取一支1g/支氯金酸，用超纯水润溶解并定容至50ml，然后用0.45μm微孔滤膜过滤，并置于2～8℃保存；2％柠檬酸三钠：称量1g柠檬酸三钠用超纯水溶解并定容至50ml，然后用0.45μm微孔滤膜过滤，并置于2～8℃保存；③烧制0.02％胶体金：称取100ml纯化水至烧杯内，取1.0ml2％氯金酸至烧杯中混匀，加热至沸腾时，迅速加入2％柠檬酸三钠1.1～1.4ml，观察溶液颜色变化，带颜色稳定不变后，继续加热5分钟，然后停止加热，将溶液冷却至室温，再定容至100ml；④胶体金的检测：使用紫外分光光度计检测，波长400nm～650nm，检测范围0～2.5A；2CN110702927A权利要求书2/2页(2)胶体金-抗AMH单克隆抗体1耦连物的制备取2ml的胶体金，加入3～10μl的0.1MK2CO3溶液，在磁力搅拌器上混匀，加入12～20ug的抗体，磁力搅拌1h