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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112198321A(43)申请公布日2021.01.08(21)申请号202010978150.5G01N33/532(2006.01)(22)申请日2020.09.17(71)申请人安徽安科生物工程(集团)股份有限公司地址230088安徽省合肥市高新区海关路9号(72)发明人徐振山徐飞鸿马倩胡源周业亭蔡成云吴萍萍宋礼华(74)专利代理机构合肥诚兴知识产权代理有限公司34109代理人汤茂盛(51)Int.Cl.G01N33/74(2006.01)G01N33/577(2006.01)G01N33/535(2006.01)权利要求书2页说明书9页附图1页(54)发明名称抗缪勒氏管激素检测试剂盒及其制备方法和使用方法(57)摘要本发明涉及生物技术领域,具体涉及一种抗缪勒氏管激素检测试剂盒,包括包被AMH单克隆捕捉抗体的酶标板、生物素标记的AMH单克隆检测抗体、链亲和素标记的辣根过氧化物酶、AMH标准品、显色底物、样本稀释液、浓缩洗涤液、终止液。本发明还涉及上述检测试剂盒的制备方法和使用方法。上述方案,采用生物素亲和素系统ELISA,检测结果灵敏度高;采用两步法,将常规操作中分开加入的标准品/样品和生物素标记的抗体一起加入,缩短了操作时间,降低了成本。CN112198321ACN112198321A权利要求书1/2页1.一种抗缪勒氏管激素检测试剂盒,其特征在于:包括包被AMH单克隆捕捉抗体的酶标板、生物素标记的AMH单克隆检测抗体、链亲和素标记的辣根过氧化物酶、显色底物、终止液。2.根据权利要求1所述的抗缪勒氏管激素检测试剂盒,其特征在于:还包括AMH蛋白标准品、样品稀释液、洗涤液。3.根据权利要求1所述的抗缪勒氏管激素检测试剂盒,其特征在于:所述显色底物为TMB显色液,包括显色液A和显色液B,所述的显色液A为含有0.02-0.04wt%过氧化氢的柠檬酸缓冲液;所述显色液B为以含有18-22wt%二甲基亚砜的柠檬酸缓冲液为溶剂,以四甲基联苯胺为溶质,经配制得到的浓度为0.3-0.5mg/ml的四甲基联苯胺溶液。4.根据权利要求1所述的抗缪勒氏管激素检测试剂盒,其特征在于:所述终止液是浓度为1.8-2.2mmol/L的硫酸溶液。5.根据权利要求2所述的抗缪勒氏管激素检测试剂盒,其特征在于:每1000ml样品稀释液中含有:7-9gNaCl、0.35-0.45gNa2HPO4、2.6-3.0gNaH2PO4、9-11gBSA、0.8-1.2g硫柳汞钠。6.根据权利要求2所述的抗缪勒氏管激素检测试剂盒,其特征在于:每1000ml洗涤液中含有:75-85gNaCl、26-30gNa2HPO4·12H2O、3.8-4.0gNaH2PO4·2H2O、4.5-5.5mlTween-20。7.一种如权利要求1-6任一所述抗缪勒氏管激素检测试剂盒的制备方法,包括如下步骤:(1)由AMH单克隆捕捉抗体包被96孔酶标板;(2)用抗体稀释液将第二AMH单克隆抗体稀释至工作浓度1.0-4.0ug/ml;(3)用抗体稀释液将链亲和素标记的辣根过氧化物酶稀释成工作液,链亲和素标记的辣根过氧化物酶与抗体稀释液体积比为1:100-1:400;(4)样品稀释液:7-9gNaCl、0.35-0.45gNa2HPO4、2.6-3.0gNaH2PO4、9-11gBSA、0.8-1.2g硫柳汞钠,加纯化水溶解、定容至1000ml;浓缩洗涤液:75-85gNaCl、26-30gNa2HPO4·12H2O、3.8-4.0gNaH2PO4·2H2O、4.5-5.5mlTween-20,加纯化水溶解、定容至1000ml;浓缩洗涤液工作液:将上述浓缩洗涤液用纯化水稀释得到浓缩洗涤工作液,其中浓缩洗涤液和纯化水体积比为1:10;pH9.6碳酸盐缓冲液:2.5-3.5gNaHCO3,1-2gNa2CO3加纯化水溶解,定容至1000ml。封闭液:70-80gNaCl、30-40gNa2HPO4·12H2O、1-5gKCl、2.5-2.9gKH2PO4加纯化水溶解、定容至1000ml,用浓盐酸和NaOH调解pH至7.2-7.6,配置成PBS溶液,10-30gBSA加1000mlPBS溶解,配成1%-3%BSA溶液即为封闭液;抗体稀释液:0.5-2gBSA溶解于100mlPBS,配置成0.5-2%BSA溶液即为抗体稀释液。终止液:浓度为1.8-2.2mmol/L的硫酸溶液;TMB显色底物包括显色液A和显色液B;显色液A:用柠檬酸缓冲液将30wt%过氧化氢稀释至0.02-0.04wt%;显色液B:用含18-22wt%二甲基亚砜的柠檬酸缓冲液将四甲基联苯胺稀释至0.3-0.5mg/ml。2CN112198321A权利要求书