一种同时检测马梨形虫病和马传染性贫血病的三重荧光PCR引物、试剂盒及方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108411032A(43)申请公布日2018.08.17(21)申请号201810106059.7C12R1/93(2006.01)(22)申请日2018.02.02C12R1/90(2006.01)(71)申请人广州维伯鑫生物科技有限公司地址510663广东省广州市广州高新技术产业开发区科学城科丰路31号G11栋201号(72)发明人邓春兴徐贵峰张健彬邓月梅徐贵云(74)专利代理机构广州嘉权专利商标事务所有限公司44205代理人胡辉(51)Int.Cl.C12Q1/70(2006.01)C12Q1/6851(2018.01)C12Q1/04(2006.01)权利要求书2页说明书8页序列表2页附图4页(54)发明名称一种同时检测马梨形虫病和马传染性贫血病的三重荧光PCR引物、试剂盒及方法(57)摘要本发明公开了一种同时检测马梨形虫病和马传染性贫血病三重荧光定量PCR引物、试剂盒及方法。本发明分别设计3对特异性PCR引物和3条荧光Taq-MAN探针，在一个反应内同时检测马梨形虫病(马泰勒虫和驽巴贝斯虫)和马传染性贫血病(马传染性贫血病毒)的三重荧光PCR检测试剂盒。本发明能同时快速检测马泰勒虫、驽巴贝斯虫和马传染性贫血病毒，三个检测荧光信号及扩增效率互不干扰，而且灵敏度高、操作简易、重复性好，临床上具有极高的应用价值。CN108411032ACN108411032A权利要求书1/2页1.一种同时检测马泰勒虫、驽巴贝斯虫和马传染性贫血病毒三重荧光定量PCR引物，其核苷酸序列如下所示：马泰勒虫引物：THF1：5'-CGTTTACTTTGAGAAAATTAGAG-3'，THR1：5'-TAACCATTACTCYGGCTCCT-3'；驽巴贝斯虫引物：BAF1：5'-AATCCGGCCAATAGCACT-3'，BAR1：5'-CGCGAGTCACGTTCTTCT-3'；马传染性贫血病毒引物：EIAVF1：5'-AAGGTGACGGTHCAGGGGT-3'，EIAVR1：5'-AACRTCYTCCAGCAATGGAA-3'。2.一种同时检测马泰勒虫、驽巴贝斯虫和马传染性贫血病毒三重荧光定量PCR探针，其核苷酸序列如下所示：马泰勒虫探针：THP1：5'-CTTTTGCCTTGAATACTTTAGCATGGAAT-3'；驽巴贝斯虫探针：BAP1：5'-CAAGAACCACAGTTACTTCCACGAC-3'；马传染性贫血病毒探针：EIAVP1：5'-TAARTCCACCAAACTTAGCGCCCAG-3'。3.根据权利要求2所述的探针，其特征在于，所述探针的5'标记的荧光基团为：FAM、VIC、TEXASRED中的一种，探针的3'标记的淬灭基团为：BQ1、BQ2中的一种；且探针THP1、BAP1和EIAVP1的5'标记的荧光基团不一致。4.一种同时检测马泰勒虫、驽巴贝斯虫和马传染性贫血病毒三重荧光定量PCR试剂盒，其特征在于，该试剂盒中含有权利要求1所述的引物。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，该试剂盒中还含有权利要求2或3所述的探针。6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，该试剂盒中还含有酶液，所述酶液由Taq酶、MLV酶和酶稀释液组成。7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述Taq酶、MLV酶和酶稀释液的体积比为3.5～4.5：1：4.5～5.5。8.一种同时检测马泰勒虫、驽巴贝斯虫和马传染性贫血病毒三重荧光定量PCR方法，其特征在于，包含以下步骤：1)提取样本核酸；2)以提取的核酸为模板，用权利要求1所述的引物THF1、THR1、BAF1、BAR1、EIAVF1和EIAVR1，及权利要求2或3所述探针THP1、BAP1和EIAVP1进行荧光PCR扩增反应获得扩增产物；3)对扩增产物进行曲线分析，确定样品中是否含有马泰勒虫、驽巴贝斯虫、马传染性贫血病毒。9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：步骤2)中的荧光PCR扩增反应体系为：2CN108411032A权利要求书2/2页所述酶液含有Taq酶和MLV酶。10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤2)中的荧光PCR扩增反应程序为：40-45℃逆转录15～20min，循环1次；93～95℃预变性1～10min，循环1次；93～95℃变性5～15s，循环36～45次；55～60℃退火、延生及信号采集30～60s，循环36～45次。3CN108411032A说明书1/8页一种同时检测马梨形虫病和马传染性贫血病的三重荧光PCR引物、试剂盒及方法技术领域[0001]本发明属于核酸检验领域，关于一种同时检测马梨形虫病和马传染性贫血病毒三重荧光定量PCR引物、试剂盒及方法。背景技术[0002]马梨