抗缪勒氏管激素光激发化学发光检测试剂盒制备方法及其试剂盒和使用方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108982879A(43)申请公布日2018.12.11(21)申请号201810380941.0(22)申请日2018.04.25(71)申请人上海铭源数康生物芯片有限公司地址201403上海市奉贤区现代农业园区汇丰北路699号(72)发明人李亨芬施晓燕柳飞舟(74)专利代理机构上海天翔知识产权代理有限公司31224代理人吕伴(51)Int.Cl.G01N33/74(2006.01)G01N33/531(2006.01)G01N33/532(2006.01)G01N33/543(2006.01)权利要求书3页说明书12页附图1页(54)发明名称抗缪勒氏管激素光激发化学发光检测试剂盒制备方法及其试剂盒和使用方法(57)摘要本发明公开的抗缪勒氏管激素光激发化学发光检测试剂盒制备方法，包含如下步骤：(1)发光试剂缓冲液的配制步骤；(2)抗AMH抗体偶联发光微粒制备步骤；(3)生物素标记抗AMH抗体制备步骤；(4)亲和素标记感光微粒制备步骤；(5)AMH校准品的制备步骤。本发明还公开了由该抗缪勒氏管激素光激发化学发光检测试剂盒制备方法制备的抗缪勒氏管激素光激发化学发光检测试剂盒以及该抗缪勒氏管激素光激发化学发光检测试剂盒的使用方法。本发明利用光激发化学发光的方式，即利用感光微粒和发光微粒之间的单线态氧传递作用来发光，实现两种微粒的结合及发光，使检测特异性提高；发光材料包裹在发光微粒的颗粒中，不容易受环境干扰，有更高的特异性和稳定性。CN108982879ACN108982879A权利要求书1/3页1.抗缪勒氏管激素光激发化学发光检测试剂盒制备方法，其特征在于，包含如下步骤：(1)发光试剂缓冲液的配制步骤；(2)抗AMH抗体偶联发光微粒制备步骤；(3)生物素标记抗AMH抗体制备步骤；(4)亲和素标记感光微粒制备步骤；(5)AMH校准品的制备步骤。2.如权利要求1所述的抗缪勒氏管激素光激发化学发光检测试剂盒制备方法，其特征在于，所述发光试剂缓冲液的配置步骤由以下步骤组成：①称取HEPES6g于1L的容器中，加入适量的纯化水搅拌，②用移液器移取5mL的TritonX-100于100mL纯化水的烧杯中，完全溶解后倒入上述1L容器中，加入纯化水至900mL并充分搅拌；③调节pH计测量溶液pH，加入HCl或NaOH调节pH，使其控制在7.2-7.4；④称取酪蛋白1g加入上述1L容器中，搅拌均匀，使其充分溶解；⑤称取1gDextran500加入上述1L容器中，搅拌均匀，使其充分溶解，⑥定容至1L，用0.2μm滤器过滤，过滤后贴好标签于2-8℃无菌环境下贮存。3.如权利要求1所述的抗缪勒氏管激素光激发化学发光检测试剂盒制备方法，其特征在于，所述抗AMH抗体偶联发光微粒制备步骤由以下步骤组成：①发光微粒的准备：吸取一定量的发光微粒于高速冷冻离心机中离心，弃去上清，用一定量0.05MpH6.0MES缓冲液，超声破碎至发光微粒重新悬浮，加入0.05MpH6.0MES缓冲液调节发光微粒浓度为100mg/mL；②抗体的准备：将100μg抗AMH单克隆抗体加入到超滤管中，10000g冷冻离心10分钟，用0.05MpH6.0的MES缓冲液重复洗涤5次后，将AMH抗体浓度调节至8mg/mL；③将上述准备好的100mg/mL的发光微粒混悬液与8mg/mL的抗AMH抗体以10-50:1的质量比混合，迅速涡旋混匀，得到反应液；④用0.05MpH6.0的MES缓冲液配制25mg/mL的NaBH3CN溶液，再按照与反应液1:25的体积比加入，迅速涡旋混匀，37℃避光旋转反应48小时；⑤用0.05MpH6.0MES缓冲液配制75mg/mL的甘氨酸溶液以及25mg/mL的NaBH3CN溶液，按照与反应液2:1:10的体积比加入上述溶液中，迅速涡旋混匀，37℃旋转反应2小时，再加入200mg/mL的BSA溶液(0.05MpH6.0MES缓冲液溶解)，其与反应液体积比为5:8，迅速涡旋混匀，37℃避光旋转反应16小时；⑥用0.05MpH6.0MES缓冲液离心清洗三次，最后用试剂盒发光试剂缓冲液进行重悬保存。4.如权利要求3所述的抗缪勒氏管激素光激发化学发光检测试剂盒制备方法，其特征在于，所述发光微粒是指填充有发光化合物和镧系元素化合物的高分子微粒。5.如权利要求4所述的抗缪勒氏管激素光激发化学发光检测试剂盒制备方法，其特征在于，所述发光化合物为二氧杂环己烯(Dioxene)或二甲基噻吩(thioxene)的衍生物。6.如权利要求4所述的抗缪勒氏管激素光激发化学发光检测试剂盒制备方法，其特征在于，所述镧系元素化合物为Eu(TTA)3/TOPO或Eu(TTA)3/Phen。7.如权利要求4所述的抗缪勒氏管激