一种测定抗缪勒氏管激素的试剂盒及其制备和使用方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111999510A(43)申请公布日2020.11.27(21)申请号202010843215.5G01N33/543(2006.01)(22)申请日2020.08.20(71)申请人安徽伊普诺康生物技术股份有限公司地址236000安徽省合肥市包河经济开发区繁华大道与吉林路交口东南角联东U谷第一期18号楼1-4层(72)发明人谭海娟徐运朱雨胡苗苗吴泽东张金东(74)专利代理机构合肥市浩智运专利代理事务所(普通合伙)34124代理人叶濛濛(51)Int.Cl.G01N33/74(2006.01)G01N33/577(2006.01)权利要求书2页说明书13页附图5页(54)发明名称一种测定抗缪勒氏管激素的试剂盒及其制备和使用方法(57)摘要一种测定抗缪勒氏管激素的试剂盒，涉及医学及生物化学技术领域，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，试剂R1包括：Tris‑HCl缓冲液、TWEEN20、PEG‑8000、NaCl、二价金属盐、Proclin300，溶剂为纯化水；试剂R2包括：MES缓冲液、EDC、乳胶微球、AMH单克隆抗体1、AMH单克隆抗体2、BSA、Proclin300，溶剂为纯化水。本发明还公开了一种测定抗缪勒氏管激素的试剂盒的制备方法和使用方法。本发明相比现有技术的优点在于：本发明的试剂盒采用大粒径微球对两株不同位点的单抗分别偶联，提高了低值灵敏度，检测精密度好；本发明可检测血清和不同抗凝剂血浆，不同样本类型相关性好，检测准确度高。CN111999510ACN111999510A权利要求书1/2页1.一种测定抗缪勒氏管激素的试剂盒，其特征在于，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：试剂R1：其溶剂为纯化水；试剂R2：其溶剂为纯化水。2.根据权利要求1所述的一种测定抗缪勒氏管激素的试剂盒，其特征在于：所述试剂R1中二价金属盐包括CaCl2、MgCl2、FeCl2、XnCl2或CuCl2。3.根据权利要求2所述的一种测定抗缪勒氏管激素的试剂盒，其特征在于：所述试剂R1中二价金属盐MgCl2。4.根据权利要求1所述的一种测定抗缪勒氏管激素的试剂盒，其特征在于：所述乳胶微球为羧基化乳胶微球。5.根据权利要求1所述的一种测定抗缪勒氏管激素的试剂盒，其特征在于：所述乳胶微球的粒径为180-400nm。6.一种制备如权利要求1-5任一项所述的测定抗缪勒氏管激素的试剂盒的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)配制试剂R12CN111999510A权利要求书2/2页a.按照试剂R1的组分含量，将Tris-HCl溶于纯化水中，搅拌均匀后，配置成缓冲液；b.按照试剂R1的组分含量，将Tween20溶于制得的缓冲液中，搅拌均匀后，再将PEG8000、NaCl、二价金属离子和Proclin300溶于其中，即制得试剂R1液；(2)配制试剂R2a.按照试剂R2的组分含量，将MES溶于纯化水中，搅拌均匀后，配置成缓冲液；b.按照试剂R2的组分含量，将EDC溶于步骤a制得的缓冲液中，搅拌均匀；c.再将乳胶微球溶于步骤b制得的缓冲液中，搅拌均匀后，室温混匀20min；d.按照试剂R2的组分含量，分别将AMH单克隆抗体1和AMH单克隆抗体2溶于步骤c制得的溶液中，搅拌均匀后，37℃混匀1-3h。e.按照试剂R2的组分含量，将BSA溶于步骤d制得的溶液中，搅拌均匀后，室温混匀1-2h，即制得试剂R2液。7.一种使用如权利要求1-5任一项所述的测定抗缪勒氏管激素的试剂盒的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将待测样品与试剂R1混合，37℃孵育5min；(2)加入试剂R2，混合均匀；(3)采用全自动生化分析仪测定加入试剂R2后的混合液的吸光度A1；(4)300s后，采用全自动生化分析仪再测定一次混合液的吸光度A2；(5)根据吸光度变化值计算出样本中的AMH的浓度。8.根据权利要求7所述的测定抗缪勒氏管激素的试剂盒的使用方法，其特征在于，所述步骤(1)和步骤(2)中，试剂R1和试剂R2按照体积比3:1混合。9.根据权利要求7所述的测定抗缪勒氏管激素的试剂盒的使用方法，其特征在于，所述步骤(3)和步骤(4)中，在主波长600nm处用全自动生化分析仪测定其吸光度。10.根据权利要求7所述的测定抗缪勒氏管激素的试剂盒的使用方法，其特征在于，所述步骤(5)中，吸光度变化值为ΔA，即ΔA＝A2-A1。3CN111999510A说明书1/13页一种测定抗缪勒氏管激素的试剂盒及其制备和使用方法技术领域[0001]本发明涉及医学及生物化学技术领域，尤其涉及一种测定抗缪勒氏管激素的试剂盒及其制备和使用方法。背景技术[0002]抗缪勒氏管激素(Anti-Mueller