一种诱导性多能干细胞保存液及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112616831A(43)申请公布日2021.04.09(21)申请号202110026917.9(22)申请日2021.01.09(71)申请人宋文海地址210002江苏省南京市玄武区新街口街道四牌楼2号(72)发明人宋文海刘通(51)Int.Cl.A01N1/02(2006.01)权利要求书1页说明书5页(54)发明名称一种诱导性多能干细胞保存液及其制备方法(57)摘要本发明公开了一种诱导性多能干细胞保存液，由以下原料组成：DMEM培养基、富勒烯C90、芝麻酚、腺苷环磷酸酯、乙醇胺、亚油酸、低分子量透明质酸纳、高分子量透明质酸钠、维生素E。保存液中的DMEM培养基有助于细胞维持活性，添加的富勒烯C90、芝麻酚、腺苷环磷酸酯解决了在保存过程中诱导性多能干细胞容易聚集成团影响细胞活性的问题，乙醇胺、亚油酸、低分子量透明质酸纳、高分子量透明质酸钠有助于保持细胞外的渗透压，为细胞提供稳定的外环境，提高细胞的存活率。本发明的保存液有效延长保存时间，建立了稳定的诱导性多能干细胞保存体系，为临床应用提供保障。本发明还提供了上述保存液的制备方法，制备过程简便，易于操作，适合批量化的生产应用。CN112616831ACN112616831A权利要求书1/1页1.一种诱导性多能干细胞保存液，其特征在于，由以下原料组成：DMEM培养基、富勒烯C90、芝麻酚、腺苷环磷酸酯、乙醇胺、亚油酸、低分子量透明质酸纳、高分子量透明质酸钠、维生素E。2.根据权利要求1所述诱导性多能干细胞保存液，其特征在于，以培养基终体积计，各组分的用量为：富勒烯C9040‑50μg/mL、芝麻酚35.5‑39.5μg/mL、腺苷环磷酸酯45‑55μg/mL、乙醇胺1‑5mg/mL、亚油酸8‑12mg/mL、低分子量透明质酸纳1‑5mg/mL、高分子量透明质酸钠1‑5mg/mL、维生素E5‑10mg/mL。3.根据权利要求2所述诱导性多能干细胞保存液，其特征在于，以培养基终体积计，各组分的用量为：富勒烯C9045μg/mL、芝麻酚37.5μg/mL、腺苷环磷酸酯50μg/mL、乙醇胺3mg/mL、亚油酸10mg/mL、低分子量透明质酸纳2mg/mL、高分子量透明质酸钠2mg/mL、维生素E8mg/mL。4.根据权利要求1所述诱导性多能干细胞保存液，其特征在于，所述低分子量透明质酸钠的平均分子量小于等于1万道尔顿，所述高分子量透明质酸钠的平均分子量为100‑150万道尔顿。5.如权利要求1至4所述诱导性多能干细胞保存液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：取DMEM培养基，加入富勒烯C90、芝麻酚、腺苷环磷酸酯、乙醇胺、亚油酸、低分子量透明质酸纳、高分子量透明质酸钠、维生素E，搅拌均匀即得。2CN112616831A说明书1/5页一种诱导性多能干细胞保存液及其制备方法技术领域[0001]本发明涉及一种细胞保存液，尤其涉及一种诱导性多能干细胞保存液及其制备方法。背景技术[0002]诱导性多能干细胞(inducedpluripotentstemcells，iPSCs)是2006年日本科学家山中伸弥首次利用逆转录病毒载体将Oct4、Sox2、Klf4和c‑Myc四个转录因子导入小鼠皮肤成纤维细胞中，使其重编程所获得的一种多能性干细胞。iPSCs在形态、基因及蛋白表达、表观遗传修饰状态、细胞倍增能力、类胚体和畸形瘤生成能力、分化能力等均与胚胎干细胞极为相似。[0003]iPSCs作为诱导产生的多能性干细胞，在临床疾病治疗方面的应用价值是巨大的，因为它不像传统的核移植或者细胞融合等获取干细胞的方式那样需要人的卵子或人的胚胎干细胞，从而绕开了伦理和法律等诸多障碍，并且它利用由成体细胞重编程为干细胞的特性避免了免疫排斥使得自体移植变得更加可行；另一方面，iPSCs对于干细胞自我更新机制的研究、干细胞信号调控的研究以及探索很多疾病的发病机制并寻找治疗方法都有很大意义。[0004]临床上制备的iPSCs经常需要在保存液中保存待用。常规的细胞保存液含有DMSO，即二甲基亚砜，是一种渗透性保护剂，能够降低细胞冰点，减少冰晶形成，减少自由基对细胞的损害。但DMSO存在一定的毒性作用，可与蛋白质疏水基团发生作用，导致蛋白质变性，具有血管毒性和肝肾毒性。用含DMSO的保存液保存细胞时，要求超低温保存，对保存条件要求较高。现有的一些不含DMSO的细胞保存液存在诸多问题，如保存时间短、保存条件要求苛刻，易出现细胞聚团现象，细胞的活力容易遭到破坏，存活率低等，不能满足临床应用的需求。因此有必要对iPSCs的保存液进行改进，提高其安全性及保存的效率。发明内容[0005]为了克服现有技术的不足，本发明的目的之一在于提供一种诱导性多能干细