用于转染的纳米复合物载体、核酸纳米药物及其制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113262307A(43)申请公布日2021.08.17(21)申请号202110298450.3A61K9/72(2006.01)(22)申请日2021.03.19A61K31/713(2006.01)A61K47/64(2017.01)(71)申请人中国科学院化学研究所A61P11/00(2006.01)地址100190北京市海淀区中关村北一街2A61P35/00(2006.01)号B82Y5/00(2011.01)申请人北京福纳康生物技术有限公司(72)发明人白春礼刘帅舒春英王春儒陈代钦李雪(74)专利代理机构北京悦和知识产权代理有限公司11714代理人司丽春(51)Int.Cl.A61K47/52(2017.01)A61K47/59(2017.01)A61K47/61(2017.01)权利要求书2页说明书7页附图4页(54)发明名称用于转染的纳米复合物载体、核酸纳米药物及其制备方法和应用(57)摘要本发明实施例涉及一种用于转染的纳米复合物载体、核酸纳米药物及其制备方法和应用，属于生物医药领域，用于转染的纳米复合物载体包括富勒烯衍生物和带负电荷的高分子聚合物，所述富勒烯衍生物和带负电荷的高分子聚合物通过静电相互作用和π‑π相互作用结合，且结合而成的纳米复合物载体的ζ电势为正，所述纳米复合物载体与siRNA通过静电相互作用和π‑π相互作用结合获得核酸纳米药物。本发明的纳米复合物载体可以负载siRNA药物，能够协助siRNA穿过细胞屏障，提高siRNA的转染性能，所形成的核酸纳米药物结构稳定，生物相容性好，能够有效保护siRNA不被RNA酶降解，并且能够通过呼吸道吸入给药实现siRNA的肺部转染，从而能够有效地抑制肺组织内目的基因的表达。CN113262307ACN113262307A权利要求书1/2页1.一种用于转染的纳米复合物载体，其特征在于，包括富勒烯衍生物和带负电荷的高分子聚合物，所述富勒烯衍生物和带负电荷的高分子聚合物通过静电相互作用和π‑π相互作用结合，且结合而成的纳米复合物载体的ζ电势为正。2.根据权利要求1所述的用于转染的纳米复合物载体，其特征在于，所述富勒烯衍生物和带负电荷的高分子聚合物的单体的摩尔比为1：1～8，优选为1:2；和/或，富勒烯衍生物和带负电荷的高分子聚合物形成的纳米复合物载体在水中的平均水合粒径为110～125nm，电势为30～40mV。3.根据权利要求1或2所述的用于转染的纳米复合物载体，其特征在于，所述富勒烯衍生物为衍生化的空心富勒烯或衍生化的金属富勒烯；可选地，所述空心富勒烯的分子式表示为C2n，30≤n≤60，优选地，所述富勒烯为C60或C70；所述金属富勒烯表示为M@C2n，30≤n≤60，所述M选自Sc、Y和镧系金属元素中的任意一种，可选地，所述镧系元素包括镧、铈、镨、钕、钷、钐、铕、钆、铽、镝、钬、铒、铥、镱、镥，优选地，所述金属富勒烯为Gd@C82；或，所述的富勒烯衍生物为水溶性富勒烯，水溶性富勒烯为各类带氨基官能团修饰的富勒烯衍生物，可选地，所述富勒烯为四哌嗪环氧C60衍生物，优选地，所述富勒烯的ζ电势为53.5±3.17mV。4.据权利要求1至3任一所述的用于转染的纳米复合物载体，其特征在于，所述带负电荷的高分子聚合物选自聚噻吩、透明质酸、聚乳酸、聚乳酸‑羟基乙酸共聚物和白蛋白一种或几种，可选地，所述聚噻吩的ζ电势为‑60.3±1.31mV，优选地，所述聚噻吩的分子量为350～400kDa，优选为389.8kDa，分子量的多分散系数1.4～1.6，所述聚噻吩的单体分子量为313Da。5.一种权利要求1至4任一所述的用于转染的纳米复合物载体的制备方法，其特征在于，将富勒烯衍生物的水溶液和带负电荷的高分子聚合物的水溶液震荡混合，静置后，利用0.22μm的水溶性滤膜过滤，得到纳米复合物载体水溶液。6.一种核酸纳米药物，其特征在于，包括siRNA和权利要求1至5任一所述的用于转染的纳米复合物载体，所述纳米复合物载体与siRNA通过静电相互作用和π‑π相互作用结合，且结合而成的核酸纳米药物的ζ电势为负，所述siRNA为用于抑制某疾病关键基因的表达的双链寡聚核苷酸。7.根据权利要求6所述的核酸纳米药物，其特征在于，所述的siRNA是由19对核糖核苷酸外加3’端悬垂的dTdT结构构成的双链寡聚核苷酸；和/或，所述的siRNA为PD‑L1抑制剂；和/或，所述siRNA与富勒烯衍生物的摩尔比为(0.01～0.08)：1，优选的，为0.04:1；和/或，所述的siRNA的正义链为5’‑CCCAGAACUUUCUUACAGUdTdT‑3’，反义链为5’‑ACUGUAAGAAAGUUCUGGGdTdT‑3’，所述的s