脂质包封的RNA纳米颗粒的制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113840926A(43)申请公布日2021.12.24(21)申请号202080036934.4(74)专利代理机构北京市万慧达律师事务所(22)申请日2020.03.1811111代理人赵洁王蕊(30)优先权数据62/820,4962019.03.19US(51)Int.Cl.C12N15/113(2006.01)(85)PCT国际申请进入国家阶段日A61K9/51(2006.01)2021.11.18A61K47/10(2006.01)(86)PCT国际申请的申请数据PCT/US2020/0234422020.03.18(87)PCT国际申请的公布数据WO2020/191103EN2020.09.24(71)申请人阿克丘勒斯治疗公司地址美国加利福尼亚州(72)发明人普里亚·卡马利帕玛纳·奇伍库拉约瑟夫·E·佩恩包艳洁权利要求书3页说明书60页附图5页(54)发明名称脂质包封的RNA纳米颗粒的制备方法(57)摘要一种生产脂质包封的RNA纳米颗粒的方法，该方法包括以下步骤：a)使包含RNA的水溶液流过内径(ID)为约0.1"至0.132"的第一管；b)以通过第一管的水溶液的流速的三分之一，使包含脂质的乙醇溶液流过ID为约0.005"至0.02"的第二管，其中脂质包含阳离子脂质；以及c)通过使乙醇溶液和水溶液流入混合模块中，而混合乙醇溶液与水溶液，该混合模块由垂直连接到第一管的第二管组成；其中混合产生了在第一管中流动的输出溶液，输出溶液包含在约10％至75％乙醇v/v中的RNA和脂质的湍流，并且其中脂质包封的RNA纳米颗粒具有双层结构。CN113840926ACN113840926A权利要求书1/3页1.一种生产脂质包封的RNA纳米颗粒的方法，所述方法包括以下步骤：a)使包含RNA的水溶液流过内径(ID)为约0.1"至0.132"的第一管；b)以通过第一管的水溶液的流速的三分之一，使包含脂质的乙醇溶液流过ID为约0.005"至0.02"的第二管，其中所述脂质包含阳离子脂质；以及c)通过使乙醇溶液和水溶液流入混合模块中，而混合乙醇溶液与水溶液，所述混合模块由垂直连接到第一管的第二管组成；其中，所述混合产生了在所述第一管中流动的输出溶液，所述输出溶液包含在约10％至75％乙醇v/v中的RNA和脂质的湍流，并且其中所述脂质包封的RNA纳米颗粒具有双层结构。2.根据权利要求1所述的方法，其中输出具有至少200ml/min的流速。3.根据权利要求1所述的方法，其中输出的流速具有至少2,000的雷诺数。4.根据权利要求1的方法，其中所述水溶液由第一HPLC泵以至少10psi、25psi、50psi、75psi或100psi的背压泵送通过所述第一管，并且所述乙醇溶液由第二HPLC泵以至少40psi、80psi、150psi、300psi或400psi的背压泵送通过所述第二管。5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述第一管的ID为0.132"，所述第二管的ID为0.007"、0.01"或0.02"。6.根据权利要求1所述的方法，其中，所述水溶液以至少30ml/min、45ml/min、60ml/min、75ml/min、90ml/min、105ml/min、120ml/min、150ml/min、225ml/min、262.5ml/min、300ml/min或450ml/min的流速泵送；所述乙醇溶液以至少10ml/min、15ml/min、20ml/min、25ml/min、30ml/min、35ml/min、40ml/min、50ml/min、60ml/min或75ml/min、87.5ml/min、100ml/min或150ml/min的流速泵送。7.根据权利要求1所述的方法，其中所述水溶液、乙醇溶液、输出溶液保持在15‑20℃。8.根据权利要求1所述的方法，其中，所述混合模块由不锈钢制成，并且由垂直安装在所述第一管上的所述第二管组成，其中所述第一管具有穿过壁的开口，其中所述开口为所述第二管的外径的尺寸，并且其中所述第二管安装在所述开口上，以允许所述第二管中的乙醇溶液连续移动到所述第一管中的水溶液中。9.根据权利要求1所述的方法，所述方法还包括：泵送稀释缓冲液通过第三管，并且通过在Y型连接器区域中将所述稀释缓冲液引入输出溶液，来混合所述稀释缓冲液与所述输出溶液，以产生稀释的输出溶液，其中所述Y型连接器将所述第三管连接至第一管。10.根据权利要求9所述的方法，其中所述稀释缓冲液包含：a)约10mM至20mM之间的Tris缓冲液、约45mM至55mM之间的NaCl和约8％至10％之间的蔗糖，pH在约7.4至8.5之间；或b)40mM至90mM之间的磷酸盐缓冲液，