制备负载mRNA的脂质纳米颗粒的改进方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112839639A(43)申请公布日2021.05.25(21)申请号201980067525.8F·德罗莎M·哈特莱因(22)申请日2019.08.28(74)专利代理机构北京市君合律师事务所(30)优先权数据1151762/724,5822018.08.29US代理人黄遵玲顾云峰62/725,7652018.08.31US(51)Int.Cl.(85)PCT国际申请进入国家阶段日A61K9/51(2006.01)2021.04.13A61K31/7105(2006.01)A61K38/00(2006.01)(86)PCT国际申请的申请数据C12N15/113(2006.01)PCT/US2019/0485162019.08.28(87)PCT国际申请的公布数据WO2020/047061EN2020.03.05(71)申请人川斯勒佰尔公司地址美国马萨诸塞州(72)发明人S·卡夫Z·帕特尔Y·张权利要求书2页说明书56页A·萨罗德R·L·鲍尔序列表7页(54)发明名称制备负载mRNA的脂质纳米颗粒的改进方法(57)摘要本发明提供了用于进行脂质纳米颗粒调配和mRNA包封的改进方法。在一些实施方案中，本发明提供了将信使RNA(mRNA)包封在脂质纳米颗粒中的方法，所述方法包括以低浓度混合预先形成的脂质纳米颗粒和mRNA的溶液的步骤。CN112839639ACN112839639A权利要求书1/2页1.一种将信使RNA(mRNA)包封在脂质纳米颗粒中的方法，所述方法包括：混合包含预先形成的脂质纳米颗粒和mRNA的溶液，使得形成包封mRNA的脂质纳米颗粒，其中所述预先形成的脂质纳米颗粒和/或所述mRNA以不大于0.5mg/ml的浓度存在于所述溶液中。2.如权利要求1所述的方法，其中所述预先形成的脂质纳米颗粒以不大于0.4mg/ml、0.3mg/ml、0.25mg/ml、0.2mg/ml、0.15mg/ml、0.1mg/ml、0.05mg/ml或0.01mg/ml的浓度存在。3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述mRNA以不大于0.4mg/ml、0.3mg/ml、0.25mg/ml、0.2mg/ml、0.15mg/ml、0.1mg/ml、0.05mg/ml、或0.01mg/ml的浓度存在于所述溶液中。4.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述预先形成的脂质纳米颗粒和所述mRNA中的每一者以不大于0.1mg/ml的浓度存在于所述溶液中。5.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述预先形成的脂质纳米颗粒和所述mRNA中的每一者以不大于0.05mg/ml的浓度存在于所述溶液中。6.如前述权利要求中任一项所述的方法，所述方法还包括稀释所述溶液以达到不大于0.5mg/ml的浓度的步骤。7.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述预先形成的脂质纳米颗粒包含PEG修饰的脂质。8.如权利要求7所述的方法，其中所述PEG修饰的脂质占所述脂质纳米颗粒中的总脂质的小于3％、小于2.5％、小于2％、小于1.5％或小于1％。9.如权利要求7或8所述的方法，其中所述PEG修饰的脂质占所述脂质纳米颗粒中的总脂质的0.1％至3％、或0.75％至2.5％、或0.5％至2％。10.如权利要求7至9中任一项所述的方法，其中所述PEG修饰的脂质占所述脂质纳米颗粒中的总脂质的约1％。11.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述包含预先形成的脂质纳米颗粒和mRNA的溶液包含小于10mM的柠檬酸盐。12.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述包含预先形成的脂质纳米颗粒和mRNA的溶液包含小于25％的非水性溶剂。13.如前述权利要求中任一项所述的方法，所述方法还包括在所述混合之后将所述脂质纳米颗粒和所述mRNA加热至高于环境温度的温度。14.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中在所述混合之前将所述mRNA和/或所述预先形成的脂质纳米颗粒加热至高于环境温度的温度。15.如权利要求13或14所述的方法，其中所述温度为或大于约30℃、37℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃、65℃或70℃。16.如权利要求13至15中任一项所述的方法，其中所述温度在约25‑70℃、约30‑70℃、约35‑70℃、约40‑70℃、约45‑70℃、约50‑70℃或约60‑70℃的范围内。17.如权利要求13‑16中任一项所述的方法，其中所述温度为约65℃。18.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述预先形成的脂质纳米颗粒通过将溶解在乙醇中的脂质与水性溶液混合而形成。2CN112839639A权利要求书2/2页19.如权利要求18所述的方法，其中所述预先形成的脂质纳米颗粒还包含一种或多种阳离子脂质和一种