制备负载MRNA的脂质纳米颗粒的改进方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114126588A(43)申请公布日2022.03.01(21)申请号202080049849.1N·瓦尔加斯·蒙托亚P·帕特尔(22)申请日2020.05.14A·汗穆罕默德(30)优先权数据(74)专利代理机构北京市君合律师事务所62/847,8372019.05.14US11517代理人张怡张璐(85)PCT国际申请进入国家阶段日2022.01.07(51)Int.Cl.A61K9/127(2006.01)(86)PCT国际申请的申请数据A61K9/16(2006.01)PCT/US2020/0329432020.05.14A61K31/7088(2006.01)(87)PCT国际申请的公布数据WO2020/232276EN2020.11.19(71)申请人川斯勒佰尔公司地址美国马萨诸塞州(72)发明人S·卡夫F·德罗莎M·哈特莱因A·萨罗德Z·帕特尔R·L·鲍尔权利要求书3页说明书38页附图3页(54)发明名称制备负载MRNA的脂质纳米颗粒的改进方法(57)摘要本发明提供了一种用于进行脂质纳米颗粒调配和mRNA包封的改进方法。在一些实施方案中，本发明提供了一种将信使RNA(mRNA)包封在脂质纳米颗粒中的方法，所述方法包括在药物产品制剂溶液中加热包封mRNA的脂质纳米颗粒的步骤。CN114126588ACN114126588A权利要求书1/3页1.一种将信使RNA(mRNA)包封在脂质纳米颗粒(LNP)中的方法，所述方法包括以下步骤：(a)将脂质溶液中的一种或多种脂质与mRNA溶液中的一种或多种mRNA混合，以在脂质纳米颗粒(LNP)形成溶液中形成包封在LNP内的mRNA(mRNA‑LNP)；(b)将所述LNP形成溶液更换为药物产品制剂溶液，以在药物产品制剂溶液中提供mRNA‑LNP；以及(c)加热所述药物产品制剂溶液中的所述mRNA‑LNP；其中由步骤(c)产生的所述mRNA‑LNP的包封效率大于由步骤(b)产生的所述mRNA‑LNP的包封效率。2.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤(a)中，所述一种或多种脂质包括一种或多种阳离子脂质、一种或多种辅助脂质和一种或多种经PEG修饰的脂质。3.根据权利要求2所述的方法，其中所述脂质还包括一种或多种胆固醇脂质(例如，胆固醇)。4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在步骤(a)中，所述一种或多种阳离子脂质选自cKK‑E12、OF‑02、C12‑200、MC3、DLinDMA、DLinkC2DMA、ICE(基于咪唑)、HGT5000、HGT5001、HGT4001、HGT4002、HGT4003、HGT4004、HGT4005、DODAC、DDAB、DMRIE、DOSPA、DOGS、DODAP、DODMA和DMDMA、DODAC、DLenDMA、DMRIE、CLinDMA、CpLinDMA、DMOBA、DOcarbDAP、DLinDAP、DLincarbDAP、DLinCDAP、KLin‑K‑DMA、DLin‑K‑XTC2‑DMA、3‑(4‑(双(2‑羟基十二烷基)氨基)丁基)‑6‑(4‑((2‑羟基十二烷基)(2‑羟基十一烷基)氨基)丁基)‑1，4‑二噁烷‑2，5‑二酮(靶标23)、3‑(5‑(双(2‑羟基十二烷基)氨基)戊‑2‑基)‑6‑(5‑((2‑羟基十二烷基)(2‑羟基十一烷基)氨基)戊‑2‑基)‑1，4‑二噁烷‑2，5‑二酮(靶标24)、N1GL、N2GL、V1GL以及它们的组合。5.根据权利要求2至4中任一项所述的方法，其中在步骤(a)中，所述一种或多种辅助脂质选自二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、二油酰磷脂酰胆碱(DOPC)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二油酰磷脂酰甘油(DOPG)、二棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG)、二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)、棕榈酰油酰磷脂酰胆碱(POPC)、棕榈酰油酰‑磷脂酰乙醇胺(POPE)、4‑(N‑马来酰亚胺甲基)‑环己烷‑1‑甲酸二油酰‑磷脂酰乙醇胺(DOPE‑mal)、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺(DPPE)、二豆蔻酰磷酸乙醇胺(DMPE)、二硬脂酰‑磷脂酰‑乙醇胺(DSPE)、1，2‑二芥酰基‑sn‑甘油‑3‑磷酸乙醇胺(DEPE)、16‑O‑单甲基PE、16‑O‑二甲基PE、18‑1‑反式PE、1‑硬脂酰‑2‑油酰‑磷脂酰乙醇胺(SOPE)、或它们的组合。6.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤(a)中，所述一种或多种PEG修饰的脂质包括长度为最多2kDa、最多3kDa、最多4kDa或最多5kDa的聚乙二醇链，所述聚乙二醇链共价连接至具有C6‑C20长度的烷基链的脂质。7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述脂质溶液的脂质组分由以下组成：