利用PCR技术扩增目的基因表述题.doc

利用PCR技术扩增目的基因表述题1、PCR技术由谁发明的？穆里斯2、PCR是一种什么技术？是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术3、PCR技术的目的是什么？通过指数式扩增获取大量的目的基因4、PCR技术的原理是什么？扩增的基因形态如何？DNA双链复制两种形态：一是从生物体的DNA上剪切下来一是逆转录得到的基因5、PCR扩增目的基因的前提是什么？为什么？要有一段已知目的基因的核苷酸序列目的是根据这一序列合成引物6、PCR技术为什么要有引物？引物的作用是什么？DNA聚合酶只能从5端向3端延伸DNA链且只能将单个脱氧核苷酸连接到已知的DNA片段上作用：结合在模板DNA上提供DNA延伸起始位点7、体内DNA复制和PCR技术的引物有什么不同？体内的引物是RNA完成复制后要切除。PCR技术的引物是DNA完成复制后不用切除。（体外不用RNA的原因是体外温度变化比较大用RNA会变性）8、PCR技术为什么要用两种不同的引物？且两种引物不能存在互补配对的序列原因是什么？用两种引物才能确保DNA的两条链同时被扩增避免引物自连从而导致引物不能同模板DNA结合最终使链式反应不能进一步进行9、写出PCR扩增的过程？①变性（DNA双链解开）：模板DNA加热至90-95℃使H键断开DNA成为单链后与引物结合②退火（也称复性引物与DNA单链结合）：温度降至55~60℃左右引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；③延伸（新DNA单链延伸）：DNA模板--引物结合物在DNA聚合酶的作用下于70-75℃左右以dNTP为反应原料靶序列为模板按碱基配对与半保留复制原理合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链.10、体内DNA复制和PCR技术的异同有哪些？1）温度不同：体内温度一般恒定PCR的温度高且有变化2）酶不同：体内要DNA解旋酶、DNA聚合酶PCR需要Taq酶（中文名称最好记下来）3）引物不同：体内为RNA（身身合成）PCR为DNA且要两种不同的引物。4）解旋方法不同：体内用解旋酶PCR用温度使H键断裂5）引物是否要去除：体内要PCR不用相同点：模板原料方向及配对原则相同相关回答的小问题1、PCR技术中所用的DNA聚合酶与生物体内的DNA聚合酶有什么区别？PCR技术中所用的DNA聚合酶可以耐高温2、在DNA聚合酶的作用下两条子链的延伸方向是什么？从子链的5端向3端延伸3、PCR技术中的变性和延伸的实质分别是什么？变性：DNA双链解旋延伸：以DNA单链为模板按碱基互补配对原则合成子链的过程4、PCR与人体内DNA复制相比有何特殊之处？（一般记住两点即可）PCR技术是离体条件需要高温酶要耐高温引物不需切除5、PCR技术需要的条件有：DNA模板原料(四种脱氧核苷酸dATPdTTPdCTPdGTP)Taq酶两种引物另外还需要：液体环境适宜的温度一定的酸碱度（缓冲液含Mg2+）6、PCR开始时加热到94℃的目的是什么？使DNA片段的氢键断裂7、若要检测一个人是否感染了艾滋病毒病毒你认为是否可以用到PCR技术？可以若感染了艾滋病毒则血液中有HIV病毒可以用PCR技术来扩增艾滋病毒的RNA8、引物判断9、引物的化学本质是什么？一小段单链DNA或者RNA10、PCR技术是否需要加入ATP？不需要额外单独加入ATP因为dNTP水解后会产生11、PCR复制的结果情况（第一次复制）①（第二次复制）②注意：1）①复制后得到③④②复制后得到⑤⑥2）只有④的35和⑤的53这两段才是目的基因的片段3）第二次复制后得到的四个片段都还不是基因X（第三次复制）③复制得到A（二个）⑤复制得到B（二个）④复制得到C（二个）⑥复制得到D（二个）注：1）复制三次后只有C上和B下才是目的基因X所以三次复制后只得到2个目的基因2）如果进行第四次复制：（可以得到8个目的基因）A下可得一个目的基因B上得一个B下得二个C上得二个C下得一个D上得一个3）从第三交复制结果可以看出不是目的基因X的单链片段是8段（A上两条A下一条B上一条C下一条D上一条D下二条）所以不管接下来复制多少次都有8段单链不可能形成目的基因。所以复制次数和目的基因X的关系式是：目的基因的个数=2n-2n