最新精编医学专题—流式细胞术基本原理及应用.ppt

流式细胞术原理(yuánlǐ)及应用流式细胞术流式细胞仪系统(xìtǒng)流式细胞仪的光信号(xìnhào)1.散射光信号(xìnhào)前向角散射光——FSC侧向(cèxiànɡ)角散射光——SSC散射光散点图——DotPlotReviewQuestion2.荧光(yíngguāng)信号荧光(yíngguāng)检测器Two-ColorCellAnalysis双色荧光(yíngguāng)散点图现代(xiàndài)流式细胞仪包括液流系统(xìtǒng)SampleFlowinOpticalCuvetteReviewQuestionOpticsFACSCalibur光路图OpticsElectronicsCreationofaVoltagePulse-AnalogSignalQuantificationofaVoltagePulseEffectoftheInstrumentControlsontheDataReviewReviewQuestionsReviewQuestionsReviewQuestions样本(yàngběn)处理细胞(xìbāo)悬液的制备步骤一：选择合适的荧光(yíngguāng)染料荧光产生(chǎnshēng)过程FITC和PE荧光(yíngguāng)光谱补偿(bǔcháng)模型图补偿(bǔcháng)调节前后对比步骤(bùzhòu)二：染色直接(zhíjiē)染色间接(jiànjiē)染色Avidin-BiotinmethodI示意图步骤(bùzhòu)三：数据收集和分析仪器(yíqì)设置调节关于(guānyú)同型对照数据分析如何设定阴性与阳性(yángxìng)的界限直方图散点图细胞结构细胞大小(dàxiǎo)细胞粒度细胞表面面积核浆比例DNA含量与细胞周期RNA含量蛋白质含量染色体分析流式细胞仪的临床(línchuánɡ)应用流式细胞仪的科研(kēyán)应用流式细胞仪的遗传学应用(yìngyòng)FlowCytometryWhatcanFlowCytometertellusaboutacell?细胞(xìbāo)增殖（细胞(xìbāo)周期）DNA探针(tànzhēn)NucleicacidProbesAtypicalDNAHistogram红色为正常(zhèngcháng)二倍体细胞；黄色为异倍体细胞第六十九页共一百四十三页。增殖相关(xiāngguān)基因BrdUrdIncorporationBrdUrdIncorporation细胞分裂的分析(fēnxī)TracingDye(CFSE)ApoptoticCellDeath--ageneticallyencodedcelldeathprogramwhichismorphologicallybiochemicallyandmolecularlydistinctfromnecrosisFlowcytometryofapoptoticcelldeath第七十七页共一百四十三页。FlowcytometryofapoptoticcelldeathFlowcytometryofapoptoticcelldeath第八十页共一百四十三页。Flowcytometryofapoptoticcelldeath第八十二页共一百四十三页。第八十三页共一百四十三页。FlowcytometryofapoptoticcelldeathFlowcytometryofapoptoticcelldeathPhospholipidredistribution第八十六页共一百四十三页。Flowcytometryofapoptoticcelldeath第八十八页共一百四十三页。第八十九页共一百四十三页。第九十页共一百四十三页。FlowcytometryofapoptoticcelldeathFlowCytometryofApoptoticCellsAnIntegratedApproachtoCellImmunologyImmuneFunctionassay淋巴细胞亚群分析(fēnxī)淋巴细胞亚群分析(fēnxī)第九十七页共一百四十三页。TraditionalAnalysis--PercentpositiveAbsolute