最新精编医学专题—流式细胞术原理及应用(新).ppt

流式细胞术的原理(yuánlǐ)及其应用第二页共八十一页。FLOWCYTOMETRY流式细胞术FLOWCYTOMETOR流式细胞仪FlowCytometryMeasuringpropertiesofcellsinflowFlowSortingSorting(separating)cellsbasedonpropertiesmeasuredinflowAlsocalledFluorescence-ActivatedCellSorting(FACS)分为三大类：第一类－－台式机光路调节系统(xìtǒng)固定自动化程度高操作简便易学易掌握适合用于临床第二类－－大型机科研型分辨率高可分选用于培养可选配多种激光器更灵活第三类－－新型流式细胞仪装配有2～4根激光管同时检测15个参数高速分选达50000个/s第六页共八十一页。第七页共八十一页。第八页共八十一页。流式细胞仪的主要(zhǔyào)组成部分：流式细胞术是20世纪70年代发展起来的一种技术有人将流式细胞仪比喻成高级的荧光显微镜。目前该技术以广泛用于生物及医学基础研究与临床检测在分子生物学、免疫学、遗传学、血液学、肿瘤学等领域(lǐnɡyù)内发挥着重要作用。鞘液系统(xìtǒng)光路系统(xìtǒng)光学(guāngxué)原理第二十三页共八十一页。抗体(kàngtǐ)标记的方法抗体(kàngtǐ)的选择数据处理系统流式细胞分析(fēnxī)的信息流式细胞的主要(zhǔyào)信息:FluorescenceGating流式常见(chánɡjiàn)图形(HistogramPlot)流式常见(chánɡjiàn)图形(DotPlot)流式应用(yìngyòng)常见范围实验(shíyàn)对照的设计实验标本(biāoběn)的处理SORTING（细胞(xìbāo)分选）流式细胞术的应用(yìngyòng)细胞凋亡与坏死的区别虽然凋亡与坏死的最终结果极为相似(xiānɡsì)但它们的过程与表现却有很大差别。坏死（necrosis）：坏死是细胞受到强烈理化或生物因素作用引起细胞无序变化的死亡过程。表现为细胞胀大胞膜破裂细胞内容物外溢核变化较慢DNA降解不充分引起局部严重的炎症反应。凋亡是细胞对环境的生理性、病理性刺激信号环境条件的变化或缓和性损伤产生的应答有序变化的死亡过程。其细胞及组织的变化与坏死有明显的不同。细胞(xìbāo)凋亡的生物学意义凋亡(diāowánɡ)检测每一步都有检测试剂盒1、半胱氨酸蛋白酶3检测法（早早期）2、AnnexinV-FITC/PI法（早期）3、Apo2.7检测法（早期）4、TUNEL法（晚期）5、DNA含量分析法（晚晚期）6、细胞凋亡相关基因(jīyīn)的流式细胞术检测亚二倍体峰（凋亡峰）---PIstaining不能区分(qūfēn)凋亡与死亡细胞AnnexinVAssay建议(jiànyì)用于悬浮细胞AnnexinVAssay能够(nénggòu)区分死亡与凋亡细胞周期（二）定量流式细胞术（quantitativeflowcytomety)通过检测标准微球的荧光强度获得标准曲线通过标准曲线求得待测细胞的某种生物分子的精确数值从而反映(fǎnyìng)在某种生理病理条件下出现的微细变化对临床疾病的研究、诊断及治疗等具有重要意义。微球流式芯片(xīnpiàn)技术CBA(CytometricBeadArray)（三）流式细胞术的临床(línchuánɡ)应用流式细胞术与造血(zàoxuè)干细胞移植流式细胞术与白血病免疫(miǎnyì)分型流式细胞的免疫(miǎnyì)分型：微小残留病变的检出（MRD）：MRD是白血病复发的主要(zhǔyào)根源FCM的高特异性和敏感性可以在患者缓解期检测是否有残留病变细胞早期探测MRD以免复发。有证据表明外周血淋巴细胞HLA-B27的表达及其表达程度与强直性脊髓炎的发生有很大相关性利用流式细胞术进行HLA-B27检测可同时排除(páichú)交叉反应是目前检测HLA-B27的最好方法。第五十九页共八十一页。淋巴细胞亚群分析