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淀粉酶活力的测定
摘要：本实验以萌发的种子为材料，以麦芽糖为辅助材料，测定其中α-淀粉酶和β-淀粉酶活性及其之间的差异；了解722分光光度计的应用。熟悉缓冲溶液的配置；通过对两种淀粉酶的测定得出α-淀粉酶的活力为1.368；（α+β）淀粉酶的活力为17.415，R2=
关键词：α-淀粉酶；B-淀粉酶；麦芽糖标准曲线；淀粉酶
几乎所有的植物种子中都含有淀粉酶，特别是萌发的禾谷类种子，其淀粉酶的活力最强。淀粉酶主要分为a-淀粉酶和B-淀粉酶。种子萌发时，淀粉酶的活性会随着萌发时间的推移而迅速增加，其作用是将淀粉水解为小分子糖类，供幼苗生长。a-淀粉酶随机水解a-1-4糖苷键，作为淀粉分解的起始酶而起主要作用，其水解产物为麦芽糖、麦芽三糖、糊精等；B-淀粉酶水解非还原端的第二个a-1-4糖苷键，水解产物为麦芽糖。
原理：这两种淀粉酶有不同的理化性质，a-淀粉酶不耐酸，在PH3.6以下迅速钝化；B-淀粉酶在70℃下15min被钝化。据此。可以在钝化其中之一，来测定另一个酶的活力。该试验通过先钝化B-淀粉酶来测定a-淀粉酶的活力，在与非钝化条件下测的的总淀粉酶活力比较，从而求出B-淀粉酶的活力。淀粉的水解产物麦芽糖及其他还原糖能与3，5-二硝基水杨酸试剂反映，使其还原生成红色3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，其颜色深浅与淀粉水解产物的浓度成正比，可用麦芽糖或者葡萄糖浓度表示，用比色法测定淀粉生成的还原糖的量，以单位重量样品在一定时间内生成的麦芽糖的量表示酶活力。
实验仪器及试剂
722分光光度计；离心机；恒温水浴器；研钵；具刻度试管25ml13支；刻度吸管1ml、2ml、5ml各1支；容量瓶50ml2支
(1)麦芽糖标准液（1mg/ml）；(2)DNS试剂；（4）0.1mol/Lph5.6柠檬酸缓冲液(3)1%淀粉溶液
试剂的配置
称取100mg麦芽糖，用蒸馏水溶解并定容至100ml
称取3，5-二硝基水杨,1g，溶于20ml12mol/LNaoH溶液中，加入50ml蒸馏水，在加入30g酒石酸钠，待溶解后用蒸馏水定容至100ml。塞紧瓶塞，防止CO2进入。
A液：称取分析纯柠檬酸21.01g，用蒸馏水溶解并定容至1LB液：称取柠檬酸钠29.41g，用蒸馏水溶解并定容至1L,取A液55ml与B液145ml混匀，即可制成
称取1g淀粉溶于100ml/LPH5.6的柠檬酸缓冲液中
2、选取饱满的小麦种子数粒，于培养皿中用自来水培养3~4天，小麦长1.0~1.5CM
3、麦芽糖表准曲线制作
取7支干净的具塞刻度试管，编号，按表3-1加入试剂。表3-1制作麦芽糖标准曲线配方表
1234567麦芽糖标准液（ml)00.20.40.81.21.62蒸馏水（ml)21.81.61.20.80.40麦芽糖含量（mg)00.20.40.81.21.623,5-二硝基水杨酸（ml)2222222按上表向各试管中加入试剂后摇匀，至沸水浴中煮沸5min，取出后流水冷却，加蒸馏水定容至20ml。以1号管作为空白对照调零点，在540nm波长下比色测定。以麦芽糖含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。如下：

4、酶活力测定
（1）酶液提取：称取25℃下萌发3~4天的小麦种子1.0g（芽长1.0~1.5CM），置于研钵中，加少量石英砂和2Ml蒸馏水，研磨成匀浆后转入离心管中，用7Ml蒸馏水分次将残渣洗入离心管中，提取液在适温下放置提取15~20Min,每隔数分钟搅动一次，使其充分提取。然后在3000r/Min转速下离心10Min,将上清液倒入50ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，摇匀，即为淀粉酶原液。汲取上述淀粉酶原液5ml，放入50Ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度摇匀，即为淀粉酶稀释液。
（2）酶活力的测定：取6支干净的具塞刻度试管,编号,按表3-2进行操作。表3-2配活力的测定配方表
管号I-1I-2I-3II-1II-2II-3淀粉酶原液（Ml）111000钝化β-淀粉酶置70℃水浴中15min，取出后在流水中冷却
管号I-1I-2I-3II-1II-2II-3淀粉酶稀释液（Ml）000111DNS试剂（ml)200200预保温40℃恒温水浴中保温10min
管号I-1I-2I-3II-1II-2II-31%淀粉溶液（ml）40℃111111保温40℃恒温水浴中准确保温5min
5、结果计算
用Ⅰ-2、Ⅰ-3吸光度平均值与Ⅰ-1吸光度值之差，在标准曲线上查出相应的麦芽糖含量(Mg)，再按下式计算α-淀粉酶的活力(Aα)，淀粉酶活性以每克鲜重所含麦芽糖毫克数(Mg／g·Min)表示：Aα＝CαVTFW×t×V1（18-1）Ⅱ-2、Ⅱ-3吸光度平均值与Ⅱ-1吸光度值之差，在标准曲线上查出相应的麦芽糖含量(Mg)，按式18-1计算(α＋β)-淀粉酶的活性