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淀粉酶活力的测定方法
淀粉酶主要包括α-淀粉酶、β-淀粉酶、葡萄糖淀粉酶和R-酶，它们广泛存在于动物、植物和微生物界。不同来源的淀粉酶，性质有所不同。植物中最重要的淀粉酶是α-淀粉酶和β-淀粉酶。
α-淀粉酶随机作用于直链淀粉和支链淀粉的直链部分α-1,4糖苷键，单独使用时最终生成寡聚葡萄糖、α-极限糊精和少量葡萄糖。Ca2+能使α-淀粉酶活化和稳定，它比较耐热但不耐酸，pH3.6以下可使其钝化。
β-淀粉酶从非还原端作用于α-1,4糖苷键，遇到支链淀粉的α-1,6键时停止。单独作用时产物为麦芽糖和β-极限糊精。β-淀粉酶是一种巯基酶，不需要Ca2+及Cl—等辅助因子，最适pH偏酸，与α-淀粉酶相反，它不耐热但觉耐酸，60℃保温15min可使其钝化。
通常提取液中α-淀粉酶和β-淀粉酶同时存在。可以先测定（α+β）淀粉酶总活力，然后在60℃加热15min，钝化β-淀粉酶，测出α-淀粉酶活力，用总活力减去α-淀粉酶活力，就可求出β-淀粉酶活力。
淀粉酶活力大小可用其作用于淀粉生成的还原糖与3,5-二硝基水杨酸的显色反应来测定。还原糖作用于黄色的3,5-二硝基水杨酸生成棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸，生成物颜色的深浅与还原糖的量成正比。以每克样品在一定时间内生成的还原糖（麦芽糖）量表示酶活大小。
1酶活测定方法
（1）标准曲线的制作(见下表)
①取7支20ml具塞刻度试管,预先洁净灭菌干燥,编号,按表加入试剂。②摇匀,至沸水浴中煮沸5min。取出后流水冷却,加蒸馏水定容至20ml,以1号管作为空白调零点,在520nm的波长下比色测定吸光度值。并建立通过吸光度值求麦芽糖含量的回归方程。
表1标准麦芽糖溶液成分表及OD测定值

试剂1234567麦芽糖标准液（mL）00.20.61.01.41.82.0H2O（mL）2.01.81.41.00.60.203,5-二硝基水杨酸（mL）2.02.02.02.02.02.02.0麦芽糖含量（mg）00.20.61.01.41.82.0OD520
(2)粗酶液淀粉酶活力测定
①待测粗酶液的制备：
发酵24h后发酵液4000r/min离心10min,去除菌体，在上清液中加入65％饱和度的硫酸铵，待硫酸铵充分溶解后于4℃盐析2h，然后5000r/min离心20min，得到初步纯化的淀粉酶。
②按以下顺序操作：
取预先洁净灭菌干燥试管,编号。取粗酶液1ml于各只试管中，于60℃水浴中预热5min柠檬酸淀粉缓冲液同时在60℃水中预热5min，→取柠檬酸淀粉缓冲液1ml加入试管中,于60℃水浴中保温30min→加入1.5ml3,5-二硝基水杨酸,沸水中5min,加入氢氧化钠溶液终止反应,加蒸馏水至20ml。→摇匀,用分光光度计测定OD520nm值。在上述条件下以单位体积样品在30min释放1mg麦芽糖所需的酶量为一个麦芽糖单位表示酶活性。
在标准曲线上查出相应的麦芽糖含量按下列公式计算酶活力
酶活力测定公式：
淀粉酶活力=麦芽糖含量（mg）·淀粉酶原液总体积（mL）/所加淀粉质量
每个样品按下表所示步骤操作，在反应过程中，从加入底物开始，向每支管中加入试剂的时间间隔要绝对一致：
表2样品酶活力测定步骤
反应顺序样品（重复3个）样品空白标准空白样品稀释液（ml）110蒸馏水00160℃预热5min依次加入淀粉溶液（ml）1.51.51.5混合60℃保温30min依次加入DNS试剂（ml）1.51.51.5混合100℃煮沸5min加入0.4mol/LNaOH溶液终止反应加入蒸馏水至总体积（ml）202020反应后的试样在室温下静置10min，如出现混浊需在离心机上以4,000rpm离心10min，上清液以标准空白调零，在分光光度计520nm波长处测定样品空白（A0）和样品溶液（A）的吸光值，A－A0为实测吸光值。用直线回归方程计算样品淀粉酶的活性。

2活性计算
酶活力单位定义：在60℃、PH5.6条件下，每小时从2％的可溶性淀粉溶液中释放出1mg尔麦芽糖的酶量定义为1个酶活力单位（U）
淀粉酶活性U按下式计算：
K×（A－A0）
S×（30÷60）×180

U=×F

其中：U——样品淀粉酶活性，U/ml；
K——标准曲线斜率；
F——样品溶液反应前的总量，ml；
S——样品测试量；表1中S＝1ml；
60——1小时为60min；
30——反应时间，min。

试剂
(1)2%淀粉溶液
(2)0.4mol/L氢氧化钠
(3)pH5.6柠檬酸缓冲液称取柠檬酸20.01g，溶解后定容至1000mL，为A液。称取柠檬酸钠29.41g，溶解后定容至1000mL，为B液。取A液13.7mL与B液26.3mL混匀，即为pH5.6之缓冲液。
(4)3,5-二硝基水杨酸精确称取1g3,5-二硝基水杨酸溶