一种丙型肝炎病毒F蛋白的抗原构象表位模拟肽及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102584952A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102584952A(43)申请公布日2012.07.18(21)申请号201210075990.6C07K19/00(2006.01)(22)申请日2012.03.21C12N15/51(2006.01)G01N33/576(2006.01)(71)申请人中国药科大学地址211198江苏省南京市江宁区龙眠大道639号申请人中国人民解放军南京军区军事医学研究所昆明医学院(72)发明人岳明邓小昭鲁卫东孔晶韦娟余晓杰徐孝东张云张锦海(74)专利代理机构南京经纬专利商标代理有限公司32200代理人孙忠浩(51)Int.Cl.权利要求书权利要求书11页页说明书说明书88页页C07K7/08(2006.01)序列表序列表22页页附图附图77页页(54)发明名称一种丙型肝炎病毒F蛋白的抗原构象表位模拟肽及其应用(57)摘要本发明属于分子生物学及免疫学领域，公开了丙型肝炎病毒F蛋白的抗原构象表位模拟肽及其应用。该丙型肝炎病毒F蛋白的抗原构象表位模拟肽的序列为SEQIDNO.1。本发明采用噬菌体展示技术，以鼠抗HCV-F抗血清为包被抗体，筛选了噬菌体12肽库，然后对四轮筛选后得到阳性克隆采用ELISA、DNA测序、免疫印迹、生物信息学分析等方法，最终找到了能与鼠抗HCV-F抗体特异性结合的丙型肝炎病毒F蛋白的抗原构象表位模拟肽。本发明提供的丙型肝炎病毒F蛋白抗原构象表位模拟肽可用于制备丙型肝炎F抗体诊断试剂盒。对于丙型肝炎的预防、控制具有重要的社会效益和经济效益。CN1025849ACN102584952A权利要求书1/1页1.一种丙型肝炎病毒F蛋白的抗原构象表位模拟肽，其特征是由12个氨基酸残基构成的小肽，序列如SEQIDNO.1所示。2.编码权利要求1所述的丙型肝炎病毒F蛋白的抗原构象表位模拟肽的核苷酸序列。3.根据权利要求2所述的核苷酸序列，其特征在于序列如SEQIDNO.7所示。4.根据权利要求1所述的丙型肝炎病毒F蛋白的抗原构象表位模拟肽的融合蛋白。5.一种权利要求1所述的丙型肝炎病毒F蛋白的抗原构象表位模拟肽，在制备丙型肝炎F抗体的诊断试剂中的应用。2CN102584952A说明书1/8页一种丙型肝炎病毒F蛋白的抗原构象表位模拟肽及其应用技术领域[0001]本发明属于生物医学技术领域，涉及一种丙型肝炎病毒F蛋白抗原构象表位模拟肽及其应用。背景技术[0002]国家卫生部2011年12月发布的全国法定传染病疫情报告显示，我国28种传染病中，病毒性肝炎的发病率及死亡率均位居第一。丙型肝炎病毒(hepatitisCvirus，HCV)是导致输血性或社区获得性非甲非乙型肝炎的主要病因，是丙型肝炎的病原体，在世界范围内的感染率是3％，感染者总计超过1.7亿。在我国，约75％的急性丙肝感染者会发展为慢性肝炎，约20％的患者最终发展为肝硬化和肝细胞肝癌等终末期肝病。HCV感染已成为我国乃至世界所面临的严峻的公共卫生难题。[0003]丙型肝炎病毒是单股正链RNA病毒，黄病毒科丙肝病毒属，基因组全长9.6kb，分为5’非翻译区(UTR)、一个开放阅读框(ORF)和3’非翻译区，编码10个主要蛋白：C、E1、E2、p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B。由于HCV是RNA病毒，RDRP缺乏校验性，故HCV变异率高。目前的标准治疗方案是聚乙二醇干扰素联用利巴韦林，但平均应答率不超过50％，至今尚无有效的疫苗和特效治疗药物问市。故亟需对HCV的预防、控制和治疗进一步研究。[0004]除了以上10种蛋白之外，HCV基因组还编码一种F蛋白(SynthesisofanovelhepatitisCvirusproteinbyribosomalframeshift.EMBOJ，2001，20(14)：3840-3848)，是HCV基因组C蛋白编码移位的产物，在自然感染过程中即可出现。研究发现，F蛋白在体外也可以形成与HCV病毒颗粒外形相似的，直径约35nm的病毒样颗粒，提示F蛋白可能参与HCV病毒颗粒的形成，在HCV的病毒生命周期中具有重要作用，并参与HCV的病理进程(HCVF蛋白体外自组装以及在HCV感染者肝组织中的分布研究。中华实验和临床感染病杂志，2007，1(3)：138-139)。在不同临床类型的丙肝患者中，中重度和肝硬化患者F抗体阳性率最高(ExpressionofhepatitisCvirusFproteinleadstransfectedcelltotransformation.JournalofNanjingUniversity(naturalsciences)，2010，46，40-42)；且肝细胞肝癌慢性HCV患者F抗