一种猪瘟病毒E2蛋白的抗原表位模拟肽及制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106188250A(43)申请公布日2016.12.07(21)申请号201610179886.X(22)申请日2016.03.25(71)申请人武汉科前生物股份有限公司地址430070湖北省武汉市东湖高新技术开发区高新二路419号(72)发明人但汉并王艳伟董晓辉徐高原金梅林陈焕春(74)专利代理机构武汉宇晨专利事务所42001代理人王敏锋(51)Int.Cl.C07K14/18(2006.01)G01N33/68(2006.01)G01N33/569(2006.01)权利要求书1页说明书5页序列表1页附图2页(54)发明名称一种猪瘟病毒E2蛋白的抗原表位模拟肽及制备方法和应用(57)摘要本发明公开了一种猪瘟病毒E2蛋白的抗原表位模拟肽及制备方法和应用，其步骤：A、以杆状病毒表达的猪瘟病毒E2蛋白免疫BALB/C小鼠，制备针对E2蛋白的单抗克隆抗体，经筛选鉴定获得一株具有阻断效果的单抗4A7。B、将此单抗纯化并包被在酶标板上，利用噬菌体12肽库进行筛选，每轮筛选加大筛选压力，最后获得高亲合力的阳性克隆，C、经DNA测序并进行序列比较分析，与原猪瘟病毒E2蛋白序列并不完全一致；D、利用合成肽技术将筛选得到的12个氨基酸序列进行化学合成。一种猪瘟病毒E2蛋白的模拟肽在制备治疗或预防猪瘟ELSIA抗体药物检测试剂盒中的应用。合成的短肽可做为包被抗原可用于猪瘟抗体的检测。大规模生产具有成本低，纯度高的优势。CN106188250ACN106188250A权利要求书1/1页1.一种猪瘟病毒E2蛋白的模拟肽，其特征在于：其序列为SEQIDNO:1所示的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的一种猪瘟病毒E2蛋白的模拟肽，其特征在于：其序列为SEQIDNO:2所示的核苷酸序列。3.权利要求1所述的一种猪瘟病毒E2蛋白的模拟肽在制备治疗或预防猪瘟ELSIA抗体药物检测试剂盒中的应用。2CN106188250A说明书1/5页一种猪瘟病毒E2蛋白的抗原表位模拟肽及制备方法和应用技术领域[0001]本发明属于生物技术领域。更具体涉及一种猪瘟病毒E2蛋白的抗原表位模拟肽，同时还涉及一种猪瘟病毒E2蛋白的抗原表位模拟肽的制备方法，还涉及一种猪瘟病毒E2蛋白的抗原表位模拟肽的用途。背景技术[0002]猪瘟病毒(Classicalswinefevervirus，CSFV)是黄病毒科瘟病毒属成员，猪瘟病毒引起的猪瘟是目前对我国养猪业危害较为严重的一种烈性传染病，对该病进行血清学监测有助于控制猪瘟的发生，最早检测猪瘟是用间接血凝试验，需要培养病毒，制备病毒抗原，检测时还需要绵羊红细胞，过程复杂繁琐。后来研究深入后知道猪瘟E2蛋白是病毒囊膜糖蛋白，拥有较多的中和抗体表位，在免疫学诊断上有重要意义。因此E2蛋白在大肠杆菌、杆状病毒表达系统和腺病毒等重组病毒系统中得到了表达，同时这些表达的E2蛋白还被用来作为检测CSFV抗体的抗原。目前表达E2蛋白过程依然较为复杂，表达产物还需要纯化鉴定才能做为诊断抗原。随着基因工程技术和免疫学的发展，根据基因序列进而合成多肽也可以获得抗原表位，但通常都是线性表位。研究显示，蛋白质刺激机体产生抗体的表位，90％都是构象表位，仅10％为线性表位，因此，确定抗原空间构象表位对于抗原-抗体的免疫诊断具有重要意义。[0003]噬菌体展示技术是一项十九世纪初发展起来的新的基因操作技术，它将外源多肽或蛋白与噬菌体的衣壳蛋白融合表达，融合蛋白展示在病毒颗粒表面，而编码该融合蛋白的DNA则位于病毒粒子内部，使大量多肽和其DNA编码序列之间建立了直接联系，使各种靶分子(抗体、酶等)的多肽配体通过淘选得以快速鉴定。从噬菌体随机肽库中筛选抗原表位的基本原理是生物淘选，使用纯化的单克隆抗体为靶分子可以筛选出与原始序列完全相同的线性表位抗原，也能筛选出与原始序列不同但功能相似的构象表位抗原，即模拟表位抗原。发明内容[0004]本发明的目的是在于提供了一种猪瘟病毒E2蛋白的抗原表位模拟肽，其特征是由12个氨基酸残基构成的短肽，序列如SEQIDNO:1：IRRRTRPIIKMR所示。编码所述的猪瘟病毒E2蛋白模拟抗原表位的核苷酸序列包括SEQIDNO:2：5′-ATACGACGTAGGACTAGGCCTATTATAAAGATGCGA-3′。该模拟肽可以被猪瘟病毒E2蛋白的单克隆抗体4A7(细胞保藏编号：CCTCCNO.C2014229)所识别。同时也可以被猪瘟阳性血清所识别。[0005]本发明的另一个目的是在于提供了一种猪瘟病毒E2蛋白的抗原表位模拟肽的制备方法，该方法优点是利用噬菌体随机肽库来筛选猪瘟E2单克隆抗体4A7识别的表位，可以筛选出与原始序列不同但功能相似的构象表位抗原，即模