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多聚酶链式反应扩增DNA片段.ppt
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多聚酶链式反应扩增DNA片段.ppt
专题5DNA和蛋白质技术课题2多聚酶链式反应扩增DNA片断★PCR的本质是在体外模拟细胞内DNA分子复制的过程★PCR是分子生物学研究中最强大的实验技术之一（一）DNA分子的结构一个核苷酸上的磷酸基团上的“－OH”和另一个核苷酸分子的第3位碳原子上的羟基之间失去一分子水，形成磷酸二酯键，即在相邻的两个脱氧核苷酸的3’和5’碳原子之间形成磷酸二酯键。数量庞大的四种脱氧核苷酸通过3’，5’-磷酸二酯键彼此连接起来形成脱氧核苷酸链。通常将DNA的羟基“－OH”末端称为3’端，而磷酸基团的末端称为5’端DNA分子
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1、多聚酶链式反应的概念：是一种在体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法，故又称为DNA体外扩增技术1、DNA分子的组成成分和结构脱氧核糖2、DNA分子的平面结构参与的组分解旋酶DNA双链反向平行DNA双链一、PCR的原理（PCR的技术原理）（1）PCR循环--变性（1）PCR循环--变性（1）PCR循环--变性（2）PCR循环—复性（3）PCR循环—延伸（3）PCR循环—延伸（3）PCR循环—延伸（3）PCR循环—延伸二、PCR的反应过程54、循环特点：体内DNA复制与PCR的技术区别：三、PCR反应
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多聚酶链式反应扩增DNA片段多聚酶链式反应扩增DNA片段2.2实验操作步骤2.3按照pcr反应体系配方配制反应液；（2）将pcr反应体系50μl用微量移液器转移到微量离心管（0.5ml）中；（3）将微量离心管放到pcr仪中；（4）设置pcr仪的工作参数。（5）dna在pcr仪中大量扩增。2.4水浴法：将微型离心管依次在95℃、55℃、72℃的恒温水浴锅中循环处理相应时间。3.实验注意事项3.1避免外源dna污染：所用仪器、缓冲液、蒸馏水等使用前高压灭菌。3.2缓冲液和酶分装成小份，－20℃低温保存。3.3
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温故知新1:脱氧核苷酸1碱基O5’DNA分子的复制过程是怎样的？DNA分子的复制需要哪些条件？DNA母链：提供复制的模板解旋酶：打开DNA双链4种脱氧核苷酸：合成子链的原料DNA聚合酶：催化合成DNA子链ATP：为复制过程提供能量引物：使DNA聚合酶从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸(一小段RNA)1、PCR（多聚酶链式反应）技术：是一种体外迅速扩增DNA片段的技术，它能以极少量的DNA为模板，在几小时内复制出上百万份的DNA拷贝。2、原理：利用了DNA的热变性原理，通过控制温度来控制双链的解聚与结合。DN
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