多聚酶链式反应扩增DNA片段.docx

多聚酶链式反应扩增DNA片段多聚酶链式反应扩增DNA片段2.2实验操作步骤2.3按照pcr反应体系配方配制反应液；（2）将pcr反应体系50μl用微量移液器转移到微量离心管（0.5ml）中；（3）将微量离心管放到pcr仪中；（4）设置pcr仪的工作参数。（5）dna在pcr仪中大量扩增。2.4水浴法：将微型离心管依次在95℃、55℃、72℃的恒温水浴锅中循环处理相应时间。3.实验注意事项3.1避免外源dna污染：所用仪器、缓冲液、蒸馏水等使用前高压灭菌。3.2缓冲液和酶分装成小份，－20℃低温保存。3.3每添加一种反应成分，更换一个移液器的枪头。3.4混匀后离心处理，使反应液集中在离心管底部。4.结果分析与评价4.1反应液稀释：取2µlpcr反应液，添加98µl蒸馏水；2.分光光度计调零：将100µl蒸馏水添加到比色杯中，在260nm处将分光光度计调整读数为零。4.2将100µl反应稀释液倒入比色杯中，测定在260nm处的光吸收值。4.3计算：dna含量＝50×光吸收值×稀释倍数（三）课堂总结、点评（四）实例探究例1在（）的温度范围内，dna的双螺旋结构解开a.10－20℃b.80－100℃c.20－30℃d.40－60℃解析：蛋白质大多不能忍受60－80℃的高温，而dna在80℃以上才会变性。答案：b例2关于dna的复制，下列叙述正确的是（）a.dna聚合酶不能从头开始合成dna，只能从5’端延伸dna链b.dna复制不需要引物c.引物与dna母链通过碱基互补配对进行结合d.dna的合成方向总是从子链的3’端向5’端延伸解析：由于dna聚合酶不能从头开始合成dna，只能从引物的3’端即复制方向由3’端向5’端延伸；由于dna分子是反向平行的，子链是依据碱基互补配对原则，在dna聚合酶作用下合成的，其合成方向是从子链5’端向3’端延伸。答案：c综合应用例3下列有关pcr描述，不正确的是（）a.是一种酶促反应b.引物决定了扩增的特异性c.扩增产量按y＝（1＋x）nd.扩增对象是氨基酸序列e.扩增对象是dna序列解析：pcr是一种体外迅速扩增dna片段的技术，它以极少量的dna为模板，以四种脱氧核苷酸为原理，在引物的作用下使dna聚合酶从引物的3’端连接脱氧核苷酸，短时间内迅速复制上百万份的dna拷贝，其扩增产量为y＝（1＋x）n，y代表dna片段扩增后的拷贝数，x表示平均每次的扩增效率，n代表循环次数，因此答案选d。答案：d课后探究1、pcr与生物体dna复制有何区别？2、如果在案件侦破过程中，只收集到一根毛发，但它所含的遗传信息太少，该怎么办呢？★教后小记教师在教学过程中，可以先引导学生回忆必修2的有关dna复制的知识，在此基础上，学生可加深对于pcr原理的认识。对于pcr反应过程的教学，应以读图识图为主。教材中反应过程图解详细的描绘了参与pcr的各种组成成分；每一轮反应的三个基本步骤—变性、复性、延伸；每一步骤的作用。教师在教学中可以请学生在读图的同时，结合教科书中的文字说明来加深理解。当学生遇到难以理解的地方时，教师要及时给予解答。，当前12