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原生质体的培养与融合原生质体(Protoplast)微丝第一节原生质体分离及纯化多数植物分离原生质体得经典材料-----叶肉细胞。1、机械分离法(Machanicalisolation)(1)酶得种类10(2)酶液得配制(3)分离原生质体图示原生质体分离过程(以叶片为例)叶片二、原生质体纯化与活力测定1、离心沉淀法2、漂浮法3、界面法(二)原生质体活力测定第二节原生质体培养二、培养方法定义:原生质体融合也叫做体细胞杂交,使分离出来得不同亲本得原生质体,在人工控制条件下,相互融合成一体,形成杂种细胞,并进一步发育成杂种植株得技术。原生质体融合一、原生质体融合意义番茄+马铃薯二、融合方法(一)无机盐诱导融合:NaNO3法PEG法特点:PEG法原理最为常用。 具体做法:在无菌条件下混合双亲原生质体----滴加PEG溶液,摇匀,静置---滴加高钙-高pH溶液,摇匀,静置---滴加原生质体培养液洗涤数次---离心获得原生质体细胞团---筛选---再生杂合细胞(五)电融合技术电融合法原理施加直流电场后,形成串珠得原生质体在质膜接触处发生穿孔,开始遗传物质得交流。原生质体得融合过程:三、体细胞杂种细胞筛选与鉴定异硫氰酸荧光素(FITC):绿色 异硫氰酸罗丹明(RITC):红色四、体细胞杂种植株得鉴定4-1、形态学鉴定