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原生质体培养.ppt

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DefinitionofProtoplastSub-protoplast(亚原生质体)：incompleteprotoplastwithorwithoutnucleus Nucleo-plast(核质体)：nuclearprotoplastwithlittlecytoplasm(由原生质膜和薄层细胞质包围细胞核形成的小原生质体，即小原生质体)(Miniprotoplast) Micro-protoplast（微原生质体）:protoplastwithoneorafewchromosomes Cytoplast(胞质体):enucleatedprotoplast(不含细胞核而仅含部分胞质的原生质体)CytoplastisolationinCitrusProgressinPPresearchFactsheetinplantPPresearch原生质体研究的意义AschemeofplantprotoplastmanipulationProtoplasttransformationProtoplastfusion一、原生质体分离原生质体分离的材料准备预处理及酶解酶酶溶剂及其渗透压 溶剂：原生质体培养基或特殊配制 渗透压调节剂：葡萄糖、甘露醇、山梨醇等材料预处理 在游离原生质体前对供体材料进行预处理及预培养，可提高原生质体的活力和分裂频率 用黑暗处理、低温处理和不同光质照射等方法，可提高原生质体的产量和活力。不同植物及材料类型预处理方法不同 例如，龙胆试管苗的叶片只有用4℃低温处理，甘蔗植株必须先在黑暗条件下培养12h后分离的原生质体才能分裂。柑橘离体叶片在上午、温室叶片在遮荫、适宜温度（26-30C）条件下分离效果较好EnzymetreatmentEnzymeIncubationPPpurificationTodeterminePPViabilityFactorsaffectingPPviability二、原生质体培养原生质体培养基常用激素：NAA、IAA、BA与2,4-D 常用的渗透压调节剂：甘露醇、山梨醇、蔗糖和葡萄糖等 原生质体渗透压原则：培养基渗透压与细胞渗透压等渗 柑橘原生质体培养不用激素，生长很好！