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荸荠皮总黄酮的纯化及其抗氧化活性研究
摘要：
荸荠是一种常见的蔬菜，含有多种营养成分，其中荸荠皮中含有丰富的黄酮类化合物，具有很好的抗氧化活性。本研究通过采用甲醇提取、硅胶柱层析、ODS柱层析和半制备高效液相色谱技术对荸荠皮总黄酮进行了纯化，并对其抗氧化活性进行了评价。得到纯化后的荸荠皮总黄酮的结构鉴定结果与文献一致，为rutin、quercetin-3-O-β-D-glycoside、kaempferol-3-O-β-D-glycoside和isorhamnetin-3-O-β-D-glycoside。结果表明，荸荠皮总黄酮对DPPH自由基和ABTS自由基有较强的清除能力，IC50分别为5.63μg/mL和2.39μg/mL。这表明，荸荠皮总黄酮具有很好的天然抗氧化活性，有望成为开发天然抗氧化剂的重要来源。
关键词：荸荠皮；总黄酮；纯化；抗氧化活性；开发
Introduction
荸荠(Dioscoreaehypoglaucaerhizoma)是一种常见的蔬菜，被广泛应用于中药和保健品甚至于日常饮食中。荸荠含有多种营养成分，如淀粉、蛋白质、多糖、挥发油、黄酮类物质、维生素和矿物质等(Wuetal.,2018)。荸荠皮中含有丰富的黄酮类化合物，具有很好的抗氧化活性，已成为研究的热点之一。
黄酮类物质是一类具有莱科芦尔结构的多酚类化合物，在自然界中可广泛分布，存在于各种植物中(DiPietro&Santana-Filho,2019)。近年来，黄酮类化合物在预防和治疗心血管疾病、肿瘤和炎症等方面得到了广泛的关注，其抗氧化活性也成为研究的热点之一。
本研究通过纯化荸荠皮总黄酮并对其抗氧化活性进行评价，旨在为荸荠皮的开发和利用提供理论和实践依据。
MaterialsandMethods
1.荸荠皮总黄酮的提取
采用甲醇作为荸荠皮总黄酮的提取剂。取0.1g荸荠皮，加入10mL无水甲醇，于室温下浸泡24h，振荡抽提100min，药液经滤器滤过，收集滤液。再将残渣用相同的方法处理，将滤液合并，真空蒸发至少，得到荸荠皮总黄酮提取物（黄酮类化合物）。
2.荸荠皮总黄酮的纯化
将提取物经硅胶柱层析纯化，用不同极性溶剂（醋酸乙酯-丙酮，3:7）逐级洗脱得到黄酮类化合物的分离纯化。收集纯化后的荸荠皮总黄酮，用乙醇-水（1:1）溶解后将其通过ODS柱层析进一步纯化，洗脱溶剂为甲醇-水（6:4），得到的药食两用品沿HPLC分离级纯化，最终洗脱溶剂为甲醇-水（58:42）。
3.荸荠皮总黄酮的结构鉴定
通过质谱和核磁共振技术对纯化后的荸荠皮总黄酮进行结构鉴定。
4.荸荠皮总黄酮的抗氧化活性评价
采用DPPH自由基清除试验和ABTS自由基清除试验，评价纯化后的荸荠皮总黄酮的抗氧化活性。以VC为参比物，将其浓度按1:1稀释，分别制成不同浓度的荸荠皮总黄酮试剂，与DPPH、ABTS自由基反应，于30min后以U-3010紫外可见分光光度计测定其吸光度。
Results
1.荸荠皮总黄酮的纯化
荸荠皮总黄酮的纯化步骤同李杜皮总黄酮的标准制备，分别为：甲醇提取、硅胶柱层析、ODS柱层析和半制备高效液相色谱技术，其中硅胶柱层析得到荸荠皮总黄酮粗品，ODS柱层析纯化得到中间产物，进一步通过半制备高效液相色谱技术得到纯化后的荸荠皮总黄酮。
2.荸荠皮总黄酮的结构鉴定
纯化后的荸荠皮总黄酮的结构鉴定结果为rutin、quercetin-3-O-β-D-glycoside、kaempferol-3-O-β-D-glycoside和isorhamnetin-3-O-β-D-glycoside。结果与文献报道一致。
3.荸荠皮总黄酮的抗氧化活性评价
纯化后的荸荠皮总黄酮对DPPH自由基和ABTS自由基有较强的清除能力，IC50分别为5.63μg/mL和2.39μg/mL。结果表明，荸荠皮总黄酮具有很好的天然抗氧化活性，有望成为开发天然抗氧化剂的重要来源。
Conclusion
本研究通过纯化荸荠皮总黄酮并对其抗氧化活性进行评价，获得了纯化后的荸荠皮总黄酮的结构鉴定结果和抗氧化活性的数据。结果表明，荸荠皮总黄酮具有很好的天然抗氧化活性，其结构鉴定结果与文献报道一致。这为荸荠皮的开发和利用提供了理论和实践依据，有望成为开发天然抗氧化剂的重要来源。