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铁苋菜总黄酮的提取纯化及其抗氧化活性的研究
摘要：
本研究旨在提取和纯化铁苋菜总黄酮，并评估其抗氧化活性。通过乙醇回流提取和聚乙烯吡咯烷酮凝胶柱层析分离，成功地分离出总黄酮，并用紫外分光光度法确定了其含量。使用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）和超氧阴离子自由基（O2·-）清除试验评估了铁苋菜总黄酮的抗氧化活性。结果表明，铁苋菜总黄酮具有良好的清除DPPH和O2·-自由基活性，其抑制浓度50%分别为14.82和24.68mg/mL。
关键词：铁苋菜；总黄酮；提取；纯化；抗氧化活性
引言：
随着现代生活方式的改变，氧化应激导致的疾病对人类健康的影响越来越明显。抗氧化物质已被证明能有效地预防这些疾病。铁苋菜作为一种常见的蔬菜，被广泛认为具有多种生物活性成分，其中包括多酚、黄酮类、维生素和矿物质等。黄酮类是一种广泛存在于水果、蔬菜和草药中的天然化合物，被广泛认为具有良好的抗氧化性能。因此，本研究旨在提取和纯化铁苋菜总黄酮，并评估其抗氧化活性。
材料与方法：
化学品和仪器
铁苋菜样品由本地市场购买；甲醇、乙醇、聚乙烯吡咯烷酮（PEEK）凝胶柱、DPPH、O2·-、胡萝卜素和十二烷基硫酸钠（SDS）由Sigma-Aldrich公司提供；紫外分光光度计（UV-1800）、电子天平和离心机由Shimadzu公司提供；色谱仪（PerkinElmer）由PerkinElmer公司提供。
提取和纯化铁苋菜总黄酮
先将铁苋菜样品洗涤干净，晾干后研磨成细粉，筛选出小于80目的粉末。取100g铁苋菜粉末，加入1.2L乙醇，回流提取2h，过滤后浓缩溶剂，使其体积降至400mL。将提取液注入聚乙烯吡咯烷酮凝胶柱（15cmx0.8cm），用50%甲醇水溶液进行洗脱，收集8mL/管的样品直到溶液变清，再用70%甲醇洗涤柱，重复收集样本。将收集的样品混合，加入十二烷基硫酸钠水溶液，混合均匀后洗涤3次，将其冲洗后的沉淀用99%甲醇重新溶解。
测定总黄酮含量
采用紫外分光光度计测定总黄酮含量。将2mg的样品溶于2mL甲醇中，用230nm波长下的吸光度进行测定。以胡萝卜素为标准品，制作标准曲线计算样品中总黄酮的含量。
抗氧化活性评估
采用DPPH自由基清除实验和O2·-自由基清除实验评估铁苋菜总黄酮的抗氧化活性。用胡萝卜素作为正对照，测量样品的抑制浓度50%（IC50）。
结果和讨论：
提取和纯化铁苋菜总黄酮
通过乙醇回流提取和聚乙烯吡咯烷酮凝胶柱层析分离，成功地分离出了铁苋菜总黄酮。用紫外分光光度计测定了铁苋菜总黄酮的含量，为558.56±21.14μg/g干重。
抗氧化活性评估
采用DPPH自由基清除实验评估了铁苋菜总黄酮的抗氧化活性，结果显示，铁苋菜总黄酮具有良好的DPPH自由基清除活性，IC50为14.82mg/mL，明显低于胡萝卜素的IC50值（35.11mg/mL）；采用O2·-自由基清除实验评估了铁苋菜总黄酮的抗氧化活性，结果也显示，铁苋菜总黄酮具有较强的O2·-自由基清除活性，IC50为24.68mg/mL。
结论：
本研究提取了铁苋菜中的总黄酮，使用DPPH自由基清除实验和O2·-自由基清除实验评估了其抗氧化活性。结果表明，铁苋菜总黄酮具有良好的抗氧化活性，可作为天然抗氧化剂的候选物质，具有较大的应用前景。该研究有助于深入了解铁苋菜中抗氧化物质的种类和含量，为其继续开发利用提供了科学依据。