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氨基葡萄糖液相色谱-质谱联用含量测定方法研究
摘要：
本研究建立了一种氨基葡萄糖（GlcNAc）的液相色谱-质谱联用含量测定方法。该方法采用C18柱分离，流动相为乙腈-水混合溶液，梯度洗脱。利用多反应监测（MRM）技术对两个离子对进行检测和定量，并采用内标法进行校准。该方法的线性范围为0.05-50μg/mL，检出限为0.05μg/mL，重复性良好，RSD不超过3%。
关键词：氨基葡萄糖；液相色谱-质谱联用；含量测定；内标法；多反应监测
研究背景：
氨基葡萄糖是一种重要的生物活性分子，在生物学、医学等领域中具有广泛的应用前景。因此，精确、稳定、快速地测定氨基葡萄糖的含量对于其相关研究具有重要意义。目前，通常采用高效液相色谱（HPLC）法测定氨基葡萄糖的含量。但是，传统HPLC法存在许多问题，如分离效果差、灵敏度低等，限制了其在实际应用中的推广。相对地，液相色谱-质谱联用技术（LC-MS/MS）具有高灵敏度、高特异性和高准确性等优势，可以有效地解决HPLC法中存在的问题。因此，本研究旨在建立一种LC-MS/MS法测定氨基葡萄糖含量的方法。
研究方法：
实验仪器：WatersAcquityUPLC和WatersXevoTQ-S质谱仪。
实验条件：色谱柱：ACQUITYUPLCBEHC18（2.1×100mm，1.7μm）；流动相A：10mM甲酸铵水溶液；流动相B：乙腈；柱温：30℃；流速：0.4mL/min。
实验步骤：
1.准确称取不同浓度的GlcNAc标准品，制成0.1mg/mL的标准溶液。
2.用0.1%甲酸的乙腈-水溶液将测试物稀释至不同浓度的样品溶液。取不同浓度（0.05、0.1、0.5、1、5、10、20和50μg/mL）的样品溶液，用质量浓度等于10μg/mL的Ala-Gly作为内标，制成混合标准品。
3.用0.1%甲酸的乙腈-水溶液调制梯度洗脱液，进行色谱分离。LC梯度程序如下：0-1min，5%B；1-3min，5-15%B；3-4min，15-25%B；4-6min，25-50%B；6-6.5min，50-5%B；6.5-8min，5%B。
4.将混合标准品注射至质谱仪中，使用多反应监测技术（MRM）检测两个离子对（m/z220.1→84.1和m/z220.1→70.1）的信号，定量分析样品中GlcNAc的浓度。
5.对样品进行定量分析，采用质量浓度等于10μg/mL的Ala-Gly作为内标校准。
结果及分析：
本研究建立的LC-MS/MS法测定氨基葡萄糖含量方法的线性范围为0.05-50μg/mL，检出限为0.05μg/mL，重复性良好，RSD不超过3%。本研究的结果表明，该方法具有良好的灵敏度、精度和重复性，可用于测定氨基葡萄糖的含量。
结论：
本研究建立了一种液相色谱-质谱联用方法测定氨基葡萄糖的含量。该方法具有灵敏度高、精确度高和重复性好等优点，可用于氨基葡萄糖的含量测定。同时，本研究还为其他生物活性分子的含量测定提供了参考。