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毕赤酵母表达gp96-scFv抗体及生物活性测定
绪论：
gp96是一种广泛出现于真核生物和原核生物中的蛋白分子，其主要负责参与到细胞内各种信号通路的调控。同时，gp96还被发现可以作为一种免疫促进分子，可以激活细胞的免疫应答，诱发免疫记忆效应。因此，gp96在免疫学领域中备受关注，也引发了人们对gp96抗体的研究。
通过随机重组商业phagedisplay文库，可以筛选到高亲和力和高特异性的scFv单克隆抗体，既可以为研究表达提供快速方便的工具，也可以为疾病治疗提供基础。
本文主要研究了毕赤酵母表达gp96-scFv抗体及其生物活性的测定。
材料与方法：
1.实验仪器：低温冰柜；超纯水回收系统；高速离心机；平衡离子色谱仪；电泳槽等
2.菌种培养：选择毕赤酵母（PichiapastorisGS115）表达gp96-scFv抗体，通过PCR法将scFv基因与载体经过连接、转化和筛选等步骤，获得了稳定表达的gp96-scFv该抗体菌种。
3.菌种培养以后，将细胞中的蛋白进行纯化。
4.利用SDS-PAGE和Westernblot进行蛋白质印迹检测，确保获得的纯抗体具备预期分子量和多克隆汉顿抗体的特异性。
5.生物活性测定：采用细胞增殖策略和特异性ELISA法确定gp96-scFv抗体对gp96抗原的识别特异性。
结果与讨论：
将复合物分离，鉴别碎片和单克隆汉顿抗体后，我们以平衡离子交换色谱（IEX）纯化组分。然后对纯化后的组分进行分子量鉴定，结果显示出预期的分子重量和单克隆汉顿抗体的特异性。
之后，将纯化后的gp96-scFv抗体进一步应用于生物活性测定。我们采用细胞增殖策略和特异性ELISA法确定gp96-scFv抗体对gp96抗原的识别特异性。invitro细胞增殖结果显示gp96-scFv抗体与gp96抗原具备较强的亲和力和特异性。而ELISA实验表明，gp96-scFv抗体广泛适用于不同物种的gp96抗原。因此，我们推断gp96-scFv抗体可以作为gp96结构学和免疫分子生物学的重要研究工具。
结论：
通过毕赤酵母表达gp96-scFv抗体及生物活性测定，我们成功制备了一种高特异性和亲和力的gp96抗体，并证明了其在细胞增殖和ELISA实验中的有效性。这种gp96-scFv单克隆抗体具有广泛的研究应用前景，可以用于更好地理解gp96在生物学和免疫学中的功能和特性。