人骨形态蛋白2在毕赤酵母中的表达和生物活性测定的任务书.docx

人骨形态蛋白2在毕赤酵母中的表达和生物活性测定的任务书
任务书
课题名称：人骨形态蛋白2在毕赤酵母中的表达和生物活性测定
任务目的：
1.掌握酵母的培养方法及基本的转化技术
2.建立适用于人骨形态蛋白2在毕赤酵母中高效表达的表达系统
3.构建适用于人骨形态蛋白2在毕赤酵母中高效表达的表达载体
4.生产高纯度的人骨形态蛋白2
任务方案：
1.文献调研
在进一步研究人类骨肿瘤的过程中，人骨形态蛋白2(BMP2)被发现可以促进骨细胞的分化和骨组织的形成。因此，掌握BMP2在生物制药领域中的表达情况、表达载体设计和生物活性的测定方法对于更好地研究BMP2的功能和应用有着重要意义。
2.建立适用于人BMP2在毕赤酵母中高效表达的表达系统
毕赤酵母(P.pastoris)是一种常用的真菌表达系统，以其简单易行的特点和生产高纯度蛋白的能力受到广泛的应用。由于BMP2为一种高度糖基化的蛋白质，其在非哺乳类表达系统中的高效表达较为困难，因此毕赤酵母是一个非常理想的表达系统。通过建立适用于BMP2表达的毕赤酵母系统，有助于大规模生产高纯度的BMP2。
3.构建适用于人BMP2在毕赤酵母中高效表达的表达载体
构建适用于BMP2在毕赤酵母中表达的表达载体是实现高效表达BMP2所必需的一项工作。该载体需要包含必要的启动子、多聚体序列和选择标记基因等元件，以确保Bmp2基因可以在毕赤酵母中高效表达以及方便对表达的载体进行筛选和分离。
4.生产高纯度的BMP2
通过发酵和分离纯化BMP2，可以得到高纯度的BMP2样品，这对BMP2的生物活性测定以及后续的实验研究都具有极大的重要性。
任务流程：
1.构建表达载体
将BMP2基因克隆到pPICZaA表达载体上，得到表达载体pPICZaA-BMP2，表达载体需经检验确保功能正常。
2.转化操纵
通过电穿孔法将表达载体转化到毕赤酵母GS115细胞株中，筛选出能够高效表达BMP2的表达菌株。
3.表达优化
通过试验操作和参数调整，如温度、培养medium、甲醇浓度等方法优化BMP2表达条件，提高BMP2的表达效率。
4.发酵和分离纯化
培养表达BMP2的毕赤酵母GS115细胞株，并进行发酵。对发酵产物进行固体分离、离心、滤过、SIZE-EXCLUSION和ION-EXCHANGE层析纯化，以获得高纯度的BMP2产物。
5.生物活性测定
通过细胞增殖实验、ALP活性实验等方式，对BMP2的生物活性进行测定。
以上是本任务书的主要内容，欢迎贵组织的科研人员共同协作，完成本课题。任务过程中，如有问题请及时联系本人。