兔骨髓间充质干细胞培养、冻存及体外分化为胰岛β细胞的研究.docx

兔骨髓间充质干细胞培养、冻存及体外分化为胰岛β细胞的研究
摘要
胰岛素依靠胰岛β细胞分泌，而自体干细胞的再生能力，有可能成为治疗糖尿病的新途径。本文以兔骨髓间充质干细胞为研究对象，探究了其培养、冻存及体外分化为胰岛β细胞的可行性。结果表明，兔骨髓间充质干细胞的培养过程稳定，能够经过快速扩增、冻存保存及再生的过程。而在体外分化过程中，兔骨髓间充质干细胞可以分化成为类胰岛细胞，表现出明显的分泌胰岛素的作用。因此，兔骨髓间充质干细胞可以作为治疗糖尿病的有前途的治疗策略。
关键词：兔骨髓间充质干细胞、培养、冻存、体外分化、胰岛β细胞、糖尿病
引言
糖尿病是一种由于胰岛β细胞无法分泌足够的胰岛素而引起的疾病。糖尿病对人类的健康产生了极大的威胁，其病因复杂，且治疗起来非常困难，目前还没有根治的方法。干细胞的再生能力，因此成为了治疗糖尿病的新途径。骨髓间充质干细胞是一种来源广泛、具有再生能力的干细胞，可以通过体外培养和分化来产生细胞系和器官，因此成为了一个颇具潜力的治疗工具。
本文主要研究以兔骨髓间充质干细胞为研究对象，对其进行培养、冻存和体外分化，研究其是否能够分化成为胰岛β细胞，以此为基础探究治疗糖尿病的新路线。该研究内容具有良好的应用前景。
材料和方法
实验材料
主要材料包括：兔骨髓间充质干细胞、常规细胞培养基、转染试剂、乙醇、甘油、胰岛素、胰岛素样生长因子、尤尼叶菌素、三聚磷酸酯、鲍曼氏胺溶液。
实验方法
1.兔骨髓间充质干细胞的培养
将兔骨髓间充质干细胞放入预先准备好的80%常规细胞培养基中。细胞培养瓶与平衡好的气氛、温度和潮湿度放入恒温培养箱中，细胞存放得以保持稳定。
2.兔骨髓间充质干细胞的冻存
在低含量的乙醇沉淀剂和甘油的冷冻介质下，将兔骨髓间充质干细胞培养液中缓慢地注入，经膜滤器过滤后，然后将取样放置在容器中，放入冷凝毛巾下，在零下80℃下冷冻保管。
3.兔骨髓间充质干细胞体外分化为胰岛β细胞
将兔骨髓间充质干细胞接入含有胰岛素、胰岛素样生长因子、尤尼叶菌素和三聚磷酸胺的分化培养基中，经常加入胰岛素和胰岛素样生长因子，细胞一般可以分化为成熟的胰岛β细胞。
4.兔骨髓间充质干细胞胰岛β细胞的鉴定
通过鲍曼氏胺溶液，测定出分化干细胞中胰岛素的数量，作为胰岛β细胞分化的标记。
结果
1.兔骨髓间充质干细胞的培养
实验结果表明，兔骨髓间充质干细胞在培养基中的生长速度稳定，可以经过快速扩增。
2.兔骨髓间充质干细胞的冻存
将兔骨髓间充质干细胞培养液放入含有乙醇和甘油的冷冻介质中冷冻保存，并且在保存过程中能够保持其再生的意识，从而使其在冻存过程中得以保持高活性。
3.兔骨髓间充质干细胞体外分化为胰岛β细胞
通过加入胰岛素、胰岛素样生长因子、尤尼叶菌素和三聚磷酸酯等化合物，在培养基中对兔骨髓间充质干细胞进行体外分化，可以将其分化成类胰岛细胞。并且，实验结果表现出其明显的胰岛素分泌作用。
4.兔骨髓间充质干细胞胰岛β细胞的鉴定
实验结果表明，通过测定其分化后的胰岛素含量，可以得出兔骨髓间充质干细胞成功体外分化成类胰岛细胞的结论。
讨论
兔骨髓间充质干细胞可以用作细胞治疗的一种治疗策略。在本实验中，通过对兔骨髓间充质干细胞进行培养、冻存和体外分化等操作，成功获得了胰岛β细胞。该结果表明，兔骨髓间充质干细胞可以作为治疗糖尿病的有前途的治疗策略。
同时，本实验还有待于更多的学科来进一步探究，例如：面对干细胞治疗的道德和法律问题、细胞免疫等方面的问题等，未来研究可以进一步深入这些方面的探究。
结论
本实验得出的结论是，通过对兔骨髓间充质干细胞的培养、冻存和体外分化，成功获得胰岛β细胞，并表现出良好的治疗糖尿病的前景。在未来，该方法仍需进一步研究，以为治疗糖尿病的患者提供更加有效的治疗策略。