实时定量PCR检测血中金黄色葡萄球菌DNA及快速药敏试验的方法学研究.docx

实时定量PCR检测血中金黄色葡萄球菌DNA及快速药敏试验的方法学研究
引言
金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus，简称SA），是一种造成许多疾病的致病菌，包括但不限于皮肤感染、呼吸系统感染、败血症、食物中毒等疾病。其中耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌（MRSA）尤为恶性，临床治疗时常出现药物抗性，使疾病治疗变得更加复杂。因此，开展对SA的快速、敏感、特异的检测方法和药敏试验具有重要意义。经过多年研究，实时定量PCR检测在SA检测中具有广泛的应用前景，又被称为金标准，是目前主流的检测方法之一。
本文将围绕实时定量PCR技术和快速药敏试验展开，以期近期能够对SA的检测和治疗提供更准确、更可靠的方法和方案。
实时定量PCR技术及其在SA检测中的应用
实时定量PCR是应用于检测基因表达量的一种PCR方法，是PCR技术的四种变体之一。其与传统PCR的区别主要在于实时定量PCR在PCR反应过程中实时地监测PCR产物的数量和变化，从而能够对病原体DNA定量和检测其存在与否，相比传统PCR技术更为准确和快速。实时定量PCR技术可以应用于多种病原菌检测，因其快速可靠，靶向性强，被广泛用于病原体检测、基因表达分析、单体定量等领域。
SA是一种革兰阳性细菌，其基因组中含有很多邻近基因，并经常存在于人体的皮肤和鼻部，因此在医学实践中SA是医院获得性感染的常见原因。传统的SA检测方法包括培养法和荧光定量PCR法等，这些方法需要经过多次操作和鉴定，所需时间较长，而实时定量PCR技术是快速且精确的检测方法。同时，实时定量PCR技术还具有实验过程量少、特异性高和灵敏度高等优点。
不同于荧光定量PCR法基于靶标基因的放大，实时定量PCR法应用荧光探针检测PCR过程中产生的荧光强度（即荧光素酶合成的荧光强度）。荧光探针可以检测到PCR反应的每个过程，并实时记录荧光信号，因此可以反映出PCR反应的量和质以及反应动力学等信息。同时，利用荧光探针还可以检测到检测目标所在产物的尺寸和浓度、转录本的产生速度、蛋白质的翻译速度等信息。这也是实时定量PCR在目标检测方面的很多优势。
实时定量PCR技术的优点和特色使其在SA检测中应用颇多。例如，其可以监测靶DNA量并实现定量，相对定量和比较分析对于病菌的定位和分类等方面有重要意义；同时，它的耗费成本较传统PCR法和荧光定量PCR法低，因此被广泛应用于SA的检测研究方面。
快速药敏试验及其在SA治疗中的应用
针对SA的治疗中，耐药性方面的检测和药敏评价在其治疗中起到至关重要的作用。传统的药敏试验需要经过长时间的培养和鉴定，这是不再适用于现代医疗。目前，快速药敏试验正在成为主流，快速药敏试验的优点主要在于其高效、简便和准确，它能够大大缩短治疗前的时间，并且能够快速地鉴定细菌的敏感性情况。
关于快速药敏试验的技术，现在有很多种。其中，Vitek2自动药敏试验系统是最常用和被认可的一种，它通过自动化和微创技术来处理药敏数据，并和国家和国际标准进行了比较，其准确度较高。传统的药敏试验中，实验人员需要将待检的微生物分离到金属盘上，再加入不同的抗生素试剂，观察细胞的生长，以确定其感应与否。但这种试验不仅耗时长，成本高，而且试剂也很难准确量化。但对于Vitek2来说，通过使用微孔板和电子万能试验机，实现了药敏结果的数字化，同时它能够同时检测几种不同类型的抗生素，并根据不同的生长周期，支持药敏结果的动态更新，拥有了很高的药敏检测速度，准确性和反复性，非常适合于快速菌株的检测及其药敏试验。
结论
在SA检测以及其治疗方面，实时定量PCR技术和快速药敏试验已经成为主流技术并广泛应用于临床实践。它们都具有快速、准确、特异和经济等特点，为现代治疗提供多种理想的解决方案。随着实验技术的不断创新和更新、实验方法的改进，相信我们可以在短时间内获得更为准确、高效、经济的实验结果，提升SA治疗的水平和质量，降低其治疗周期和风险。