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实时定量PCR检测血中白念珠菌DNA及快速药敏试验的方法学研究的中期报告 本研究旨在建立一种简便、快速、准确的实时定量PCR方法检测血中白念珠菌(Candidaalbicans)DNA及进行快速药敏试验。以下是本研究的中期报告。 1.实验设计 本研究选择20份血样进行实验,其中包括10份阳性样本和10份阴性样本。阳性样本均含有Candidaalbicans菌株,阴性样本中无Candidaalbicans菌株。 2.DNA提取 将血样离心分离血细胞,将红细胞裂解后收集白细胞,使用QiagenDNABloodMiniKit提取DNA。 3.PCR扩增 使用特异性引物在实验室自行合成的外源标准分子中进行PCR扩增,构建标准曲线。然后将样品分别与标准曲线一起进行PCR扩增。 4.实时定量PCR检测 利用SYBRGreenI染料进行定量PCR扩增。并结合标准曲线测定CandidaalbicansDNA的浓度。 5.快速药敏试验 在PCR扩增后,将产生的PCR产物与各种抗真菌药物进行反应,通过观察PCR产物的缩短程度来判断药敏情况。 6.结果分析 实验结果显示,20份样本均成功提取DNA,并检测到阳性样本中的CandidaalbicansDNA。快速药敏试验结果表明,本实验方法可以快速判断Candidaalbicans对多种抗真菌药物的敏感性。 7.结论 本研究建立了一种简便、快速、准确的实时定量PCR方法检测血中CandidaalbicansDNA及进行快速药敏试验。在未来的研究中,我们将进一步扩大样本量,进行临床试验,并进一步深入探究此方法的优劣之处。