免疫学概论-第章-抗原和抗体的制备与应用.ppt

第一节天然抗原的制备一、颗粒天然抗原的制备1.细菌抗原(多用液体或固体培养物集菌后处理)
1)H抗原(鞭毛抗原，蛋白质）:
用有毒力的菌株，菌液用0.3％～0.5％甲醛处理

2)O抗原（菌体抗原，细胞壁多糖抗原）:需要100℃加温2～
2.5h后应用。

3)Vi抗原（伤寒沙门菌的表面抗原，糖脂）：应在杀菌后再加0.5％～1％氯化钙溶液。

有些细胞膜成分，如组织细胞膜、血细胞膜经打碎后亦可制成颗粒抗原。颗粒抗原悬液呈乳浊状，多采用静脉内免疫法，较少使用佐剂作皮内注射。
细菌菌体抗原的制备流程图4)菌苗b.死菌苗2.血红细胞抗原和组织细胞粗抗原的制备

绵羊红细胞抗原的制备

组织和细胞粗抗原的制备
绵羊红细胞的制备流程图
2）组织和细胞粗抗原的制备

处理好的组织用生理盐水洗去血迹及污染物。将洗净的组织剪成小块，进行粉碎。

组织匀浆后通过2000～3000r/min离心10min后分成两个部分

沉淀物含有大量的组织细胞和碎片---组织和细胞粗抗原；

上清液作为提取可溶性抗原的材料，提取前还要通过1000～2000r/min20～30min的高速离心，以除去微小的细胞碎片，此时上清液应澄清来源:组织和细胞，其成分比较复杂
1.组织和细胞成分混合抗原制备
2.蛋白质抗原制备
3.核酸抗原制备
4.类脂多糖抗原制备
5.免疫球蛋白片段制备
1.组织和细胞成分混合抗原制备程序蛋白质抗原制备原理:利用各颗粒在梯度液中沉降速度不同，
使具有不同沉降速度的颗粒,处于不同密度
的梯度层内，达到彼此分离的目的。2、选择性沉淀法3．凝胶层析法（凝胶过滤法）原理：利用带离子基团的纤维素或凝胶，吸附交换带相反电荷的蛋白质抗原。各种蛋白质的等电点不同，所带电荷不同，与纤维素结合的能力有差别。当梯度洗脱时，逐步增加流动相的离子强度，使加入的离子与蛋白质竞争纤维素上的电荷位置，从而使血清中的蛋白质分成γ球蛋白、α球蛋白、β球蛋白和清蛋白等几个部分而被洗脱下来，达到分离纯化的目的。5．亲和层析法（亲和色谱）核酸抗原制备类脂多糖抗原制备免疫球蛋白片段制备酶水解免疫球蛋白示意图1.氧化法：优点是切开后，肽链不能重新
形成二硫键、便于肽链纯化；
缺点是色氨酸侧链容易被破坏
三、半抗原免疫原的制备载体类型半抗原-载体连接方法1混合半抗原-载体连接方法3半抗原-载体连接方法4第三节多克隆抗体的制备一、概念1.克隆：无性繁殖细胞系，由单一个祖先细胞分裂繁殖而形成的一簇细胞纯系。在这个家族的所有成员中，如无突变发生，其基因是完全相同的。2.多克隆抗体:用一种包含多种抗原决定簇的抗原免疫动物，可刺激机体多个B细胞克隆产生针对多种抗原表位的不同抗体。所获得的免疫血清实际上是含有多种抗体的混合物，即多克隆抗体。二、多克隆抗体的特点免疫蛋白为大分子蛋白质，具备抗原的各种性质，对异种、同种异体，甚至宿主自身都是良好的抗原，且是一个抗原复合体，带有多种抗原决定簇。Ig分子的这种异质性反映了抗体形成细胞的遗传性差异，代表抗体分子在不同水平上的遗传变异性；通常可用血清学方法检测出来，并据此将Ig及其肽链（H和L链）分成不同的血清学类型。

同种型同种异型
独特型

三、多克隆抗体的制备流程一、免疫动物选择二、免疫方法三、动物采血法第四节抗体的纯化和鉴定一、抗体特异性的纯化二、特异性IgG类抗体的纯化1975年分子生物学家G.J.F.keler和C.Milstein在细胞杂交技术的基础上，创建立杂交瘤技术，把体外培养和大量增殖的小鼠骨髓瘤细胞与经抗原免疫后的小鼠脾细胞融合，成为杂交细胞系，既具有瘤细胞易于在体外无限增殖的特性，又具有抗体形成细胞的合成和分泌特异性抗体的特点。将这种杂交瘤作单个细胞培养，可形成单细胞系，即单克隆。利用培养或小鼠腹腔接种的方法，便能得到大量的、高滴度的、非常均一的抗体NielsK.Jerne单克隆抗体杂交瘤技术的基本原理单克隆抗体制备步骤步骤1致敏淋巴细胞的准备步骤1致敏淋巴细胞的准备BALB/C小鼠步骤2骨髓瘤细胞的准备步骤3饲养层细胞的准备步骤4细胞融合步骤5选择性培养选择性培养原理：步骤6特异性抗体的检测步骤7.杂交瘤细胞的克隆化步骤8杂交瘤细胞的冻存与复苏步骤9单克隆抗体的大量制取步骤9单克隆抗体的大量制取单克隆抗体的优缺点1、字体安装与设置