无花果ACC合成酶基因克隆及其植物表达载体的构建的任务书.docx

无花果ACC合成酶基因克隆及其植物表达载体的构建的任务书
任务书
一、任务目的
1.1.该任务的目的是利用分子生物学技术，对无花果中ACC合成酶基因进行克隆，并构建相应的植物表达载体，为后续的无花果育种和生产研究提供基础。
1.2.通过对无花果中ACC合成酶基因的克隆和载体的构建，可以为今后的研究提供一个重要的基因资源。无花果的栽培已经有着悠久的历史，是一个重要的园艺产业。通过基因工程技术，能够提高无花果的抗逆性、增强其产量和品质，进一步发展无花果产业。
二、研究内容
2.1.克隆无花果ACC合成酶基因
2.1.1.通过计算机软件对无花果基因组进行分析；
2.1.2.根据基因序列设计引物，利用PCR技术从无花果基因组中扩增出目标基因；
2.1.3.将扩增出的基因序列进行序列测定和分析。
2.2.构建植物表达载体
2.2.1.将克隆出来的基因序列与植物表达载体进行连接；
2.2.2.制备大量载体并进行测序验证。
三、研究方法
3.1.基因克隆方法
3.1.1.计算机软件分析
使用富含无花果基因的数据库，应用序列比对和多序列比对，对无花果基因组中的ACC合成酶进行分析，确定其开放阅读框（ORF）。
3.1.2.PCR扩增
利用已确定的ORF，设计引物进行PCR扩增。PCR扩增条件：模板DNA100ng，引物浓度10pmol/L，2×PCRmix25μL。PCR扩增参数为：95℃，3min；95℃，30s；60℃，30s；72℃，1min30s，32次循环；72℃，12min。
3.1.3.质粒克隆
利用限制性内切酶对PCR扩增产物和植物表达载体进行限制性内切酶切割，将两者进行连接，构建植物表达载体。利用细菌转化技术，将载体转化到适当的细菌菌株中，筛选含有目标基因的质粒。
3.2.测序分析
将克隆出来的基因序列进行测序，并利用GENSCAN等软件进行序列分析。利用BLAST软件进行序列比对和下游分析，以验证克隆的准确性。
四、研究进度与安排
4.1.任务安排
任务开始之后，需要先进行实验室的基础建设工作，如基因克隆所需的一些试剂和设备的提供和规范实验流程的制定。
4.2.研究进度
任务周期为三个月，大致的进度安排如下：
第一月：进行计算机软件分析，设计引物，进行PCR扩增。
第二月：克隆目标基因并构建植物表达载体。
第三月：测序验证。
四、参考文献
1.叶爱国,岳勋业,成田英治.无花果酰基谷氨酸合成酶基因的克隆及其对气孔开度与表皮蒸腾速率的影响[J].果树学报,2001(02):S089-S092.
2.成田英治.无花果与果树种质资源的保育和遗传资源,日本:科学出版社,1999.
3.成田英治,叶爱国,岳勋业.无花果中ACC合成酶基因的克隆及其在树高调控中的应用[J].园艺学报,2001,28(02):109-114.